32

Kapitel 2. Material

2.1 Allgemeine technische Geräte

Autoklav	Gössner, Hamburg
Eismaschine AF-10	Scotsman, Mailand, Italien
Gefrierschränke	Bosch, Stuttgardt
Glaswaren	Schott, Mainz
Kühlschränke	Liebherr, Ochsenhausen
pH-Meter PHM 62	wiss.-techn. Werkstätte, Weilheim

Pipetten

Pipettierhilfe Pipetboy plus	Tecnomara/Integra Biosciences, Fernwald
Feinpipetten Research	Eppendorf, Hamburg
Einwegpipetten (5ml, 10 ml, 25 ml)	Greiner, Nürtingen
Einweg-Pasteurpipetten	Greiner, Nürtingen

Schüttelinkubator Thermostat 5320	Eppendorf, Hamburg
Schüttler, Vortex MS2 Minishaker	IKA-Werke GmbH & Co KG, Staufen
Waagen	Sartorius, Göttingen
Wasserbad	GFL, Burgwedel

2.2 Geräte und Material für die Zellkultur

24-Well Multischalen	Falcon, Oxnard, USA
6-Well Multischalen	Falcon, Oxnard, USA
96-Well Rundbodenplatten	Nunc, Roskilde, Dänemark
Bestrahlungsanlage Gamma Cell 40	Atomic Energy, Mississauga, Canada
Durchflußzytometer FACSort	Becton Dicinson, San Jose, USA
Einfrierröhrchen	Nunc, Roskilde, Dänemark
Fluorenzenzmikroskop	Nikon, Tokyo, Japan
Fluorimeter Spectrafluor	Tecan, Crailsheim
Glas-Petrischalen	Nunc, Roskilde, Dänemark
Inkubationsschränke	Jouan, Unteraching
Kulturflaschen (50 ml, 250 ml)	Falcon, Oxnard, USA
Lichtmikroskop	Nikon, Tokyo, Japan
Magnetpartikelkonzentrator MPC-1	Dynal, Oslo, Norwegen

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Neubauer Zählkammer	Fein-Optik, Blankenburg
Potter	Kontes Glass Co., Vineland, NJ, USA
Sterilwerkbänke	Heraeus, Hanau
Stickstofftanks	Taylor-Wharton, Theodore, AL, USA
Zellkulturschalen (10 cm und 14 cm Durchmesser)	Falcon, Oxnard, USA
Zellschaber	Falcon, Oxnard, USA
Zellsiebe, 40 und 100 µm Porendurchmesser	Becton Dicinson, San Jose, USA

Zentrifugen

Biofuge Fresco	Heraeus, Hanau
Centrikon T-324	Kontron, Neufahrn
Centrifuge 5402	Eppendorf, Hamburg
Megafuge 1.0	Heraeus, Hanau

2.3 Geräte und Material für die Molekularbiologie und Biochemie

96-Loch Flachbodenplatten für die Fluorimetrie	Dynatech Laboratories Ltd., Sussex, GB
Autoradiographiekassette	Amersham Buchler, Braunschweig
Blotting-Apparatur Semidry-Blotter (Fastblot)	Biometra, Göttingen
Chromatographie-Säule	Pharmacia Biotech, Uppsala, Schweden
Elektrophoresekammer, horizontal & Zubehör	Renner GMBH, Dannstadt
Gel-Imager & E.A.S.Y. Enhanced Analysis System	Herolab, Wiesloh
Heizblock	Kleinfedt Labortechnik Berlin
Heizrührer 502	Neolab, Heidelberg
Mikrowellengerät	Bosch, Stuttgart
Minigel-System für SDS-PAGE (Glasplatten, Abstandshalter, Kämme)	Biometra, Göttingen
RNA/DNA Kalkulator GeneQuant II	Pharmacia Biotech, Uppsala, Schweden
Spannungsgerät Consort 835	AGS, Heidelberg
Termocycler 9600	Perkin Elmer, Branchburg, USA
Termocycler 9700	Perkin Elmer, Branchburg, USA
Vakuum-Zentrifuge Concentrator 5301	Eppendorf, Hamburg

2.4 Chemikalien

Acrylamid/Bisacrylamid Lösung 30%	Carl Roth GmbH, Karlsruhe
Agar	Gibco BRL, Gaithersburg, USA
Agarose	Gibco BRL, Gaithersburg, USA
Ammoniumpersulfat (APS)	Merck, Darmstadt

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Ampcillin	Merck, Darmstadt
b-Mercaptoethanol	Merck, Darmstadt
Bactotrypton	DIFCO, Detroit, USA
Borsäure	Merck, Darmstadt
Bovines Serum Albumin (BSA)	Sigma, Steinheim
Bromphenolblau	Serva, Heidelberg
Cäsiumchlorid	Sigma, Steinheim
Chloroquine	Sigma, Steinheim
Choleratoxin	Sigma, Steinheim
Dextransulfat MW 500.000	Fluka, Steinheim
Di-Kaliumhydrogenphosphat	Merck, Darmstadt
Diethyl-Pyrocarbonat (DEPC)	Sigma, Steinheim
Dimethylsulfoxid (DMSO)	Serva, Heidelberg
DMRIE-CTM (1,2-dimyristyloxypropyl-3- dimethyl-hydroxy ethyl ammonium	Life Technologies, Rockville, MA, USA
DTPA (Diethylentriamin-pentaessigsäure)	Aldrich, Steinheim
Dulbeco's MEM	Biochrom, Berlin
EN3HANCE-Lösung	NEN Life Science, Boston, USA
Enhancement-Solution DELFIA, Verstärker-Lsg. für Europium	Wallac, Turku, Finnland
Essigsäure	Merck, Darmstadt
Ethanol	Baker Analyzed, Deventer
Ethidiumbromid	Carl Roth GmbH, Karlsruhe
Ethyldiamin-Tetraessigsäure-Na-Salz (EDTA)	Sigma, Steinheim
Europiumchlorid	Sigma, Steinheim
fetales Kälberserum (FKS)	Seromed, Berlin
Geniticin (G-418 Sulfat)	Gibco-BRL, Gaithersburg, USA
Glasmilch, RNaid	Bio101, Carlsbad, CA, USA
Glukose	Sigma, Steinheim
Glycerol	Serva, Heidelberg
Guanidiniumthiocyanat	Gibco-BRL, Gaithersburg, USA
Hams F 12	Biochrom, Berlin
Hefeextrakt	Merck, Darmstadt
HEPES-Puffersubstanz	Sigma, Steinheim
Hydrocortison	Sigma, Steinheim
Insulin	Sigma, Steinheim
Interleukin-2, rekombinant	R&D Systems GmbH, Wiesbaden
Isopropanol	Baker Analyzed, Deventer
Kaliumchlorid	Merck, Darmstadt

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Kaliumdihydrogenphosphat	Merck, Darmstdt
L-Glutamin	Sigma, Steinheim
Lipofectamin	Gibco BRL, Gaithersburg, USA
Magermilchpulver	Becton Dicinson, San Jose, USA
Magnesiumchlorid	Baker Analyzed, Deventer
Marker, DNA-, 1kb	Gibco-BRL, Gaithersburg, USA
Marker, Protein-, multicolored wide range 6,5-205 kD	NEN Life Science, Boston, USA
Maus-EGF	R&D Systems GmbH, Wiesbaden
N,N,N',N'-Tetraethyldiamin (TEMED)	Serva, Heidelberg
N-Lauroylsarcosin	Sigma, Steinheim
N6-Monomethyl-L-Arginin-Monoazetat (L-NMMA)	Alexis Corporation, San Diego, USA
Natriumacetat-3-hydrat	Merck, Darmstadt
Natriumazid	Sigma, Steinheim
Natriumchlorid	Merck, Darmstdt
Natriumcitrat-2-Hydrat	Merck, Darmstadt
Natriumdeoxycholat	Sigma, Steinheim
Natriumdodecylsulfat (SDS)	Serva, Heidelberg
Natriumhydrogencarbonat	Merck, Darmstadt
Natriumpyruvat	Seromed, Berlin
Natronlauge, 1 M [NaOH]	Merck, Darmstadt
Noble-Agar	Sigma, Steinheim
Nonidet P-40	Sigma, Steinheim
Olinukleotide, synthetisch	metabion, Martinsried
OPTI-MEM™	Gibco-BRL, Gaithersburg, USA
Pancoll Rat	PAN Biotech, Aidenbach
Paraformaldehyd	Sigma, Steinheim
Penicillin-Streptomycin	Gibco BRL, Gaithersburg, USA
Phenol, Tris-gesättigt	Carl Roth GmbH, Karlsruhe
Phenylmethylsulfonsäure (PMSF)	Calbiochem, San Diego, USA
Piperazin-N,N'-bis-Ethansulfonsäure (PIPES)	Sigma, Steinheim
Polyoxyethylensorbitanmonolaurat (Tween 20)	Serva, Heidelberg
Protein-A Sepharose	Boehringer, Mannheim
RPMI 1640	Biochrom, Berlin
RPMI 1640, ohne Cystein	Gibco-BRL, Gaithersburg, USA
Salzsäure (HCL)	Merck, Darmstadt
Sephadex G25	Pharmacia Biotech, Uppsala, Schweden
Silica (Silikon Dioxid)	Sigma, Steinheim
Superfect™	Qiagen, Hilden
Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan (Tris-Base)	Merck, Darmstadt
Triton X-100	Serva, Heidelberg
Xylencyanol	Serva, Heidelberg

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Zeocin™	Invitrogen, Leek, Niederlande
Radioaktive Chemikalien
35S-Cystein	Amersham Buchler, Braunschweig
35S-Methionin	Amersham Buchler, Braunschweig

2.5 Enzyme

DNA-Polymerase, Vent™-Polymerase, ThermoPol Buffer	New England Biolabs, Beverly, MA, USA
DNA-T4-Ligase	Pharmacia Biotech, Uppsala, Schweden
MMLV-Reverse Transkriptase, First strand buffer, DTT	Gibco-BRL, Gaithersburg, USA
Restriktionsenzyme	New England Biolabs, Beverly, MA, USA
Ribonuklease A	Boehringer, Mannheim
Ribonukleaseninhibitor (RNAsin)	Promega, Madison, USA
Streptavidin-Peroxidase (-POD)	Sigma, Steinheim

2.6 Versuchssysteme ("Kits")

Gel-Extraktions-Kit Jetquick	GENOMED, Bad Oeynhausen
in vitro Translationskit TNT™	Promega, Madison, USA
Kit für intrazell. FACS Färbungen Cytofix/Cytoperm	PharMingen, Hamburg
Plasmid-Präparations-Kit JetStar	GENOMED, Bad Oeynhausen
Ribonuklease A	Boehringer, Mannheim

2.7 Zelllinien

293, humane embryonale Nierenepithelzellen	DSMZ, Braunschweig
COS-1, Affen-Nierenfibrobrasten	ATCC, Rockville, MA, USA
F16-4-4-11, Hybridom (anti-RT1.A)	ECACC, Oxford, England
NBT-II, epitheliale Ratten-Tumorzellen	DSMZ, Braunschweig
NRK-52E, epitheliale Ratten-Tumorzellen	DSMZ, Braunschweig
OX-18, Hybridom (anti-RT1.A)	ECACC, Oxford, England

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2.8 Antikörper

Spezifität	Klon	Markierung	Isotyp	Quelle
CD46, human	122-2	-	Maus IgG1	Dianova, Hamburg
CD49b, human	AK 7	-	Maus IgG1	Dianova, Hamburg
CD49d, human	44H6	-	Maus IgG1	Dianova, Hamburg
CD58, human	BRIC 5	-	Maus IgG1	Dianova, Hamburg
ICAM-1, Ratte	1A/27	-	Maus IgG1	BD/PharMingen, SanDiego, USA
pan-HLA-A,-B,-C	G46.2.6	FITC	Maus IgG1	BD/PharMingen, SanDiego, USA
pan-HLA-A,-B,-C	G46.2.6	PE	Maus IgG1	BD/PharMingen, SanDiego, USA
pan-HLA-A,-B,-C	G46.2.6	-	Maus IgG1	BD/PharMingen, SanDiego, USA
pan-RT1.A	OX-18	-	Maus IgG1	BD/PharMingen, SanDiego, USA
pan-RT1.A	F16-4-4-11	-	Maus IgG1	ECACC, Oxford, England
pan-RT1.B	OX-6	-	Maus IgG1	BD/PharMingen, SanDiego, USA

2.9 Rattenstämme

DA, Haplotyp: RT1avl	M&B A/S, Dänemark
Lewis, Haplotyp: RT1l	M&B A/S, Dänemark

2.10 Bakterienstämme

SCS110	rpsL (Strr) thr leu endA thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 (lac-proAB) [F' traD36 proAB laclq ZM15]	Stratagene, La Jolla, USA
SURE	e14-(McrA-) (mcrCB-hsdSMR-mrr) 171 endA1 supE44 thi-1 gyrA96 relA1 lac recB recJ sbcC umu::Tn5(Kanr) uvrC [F' proAB lacq ZM15 Tn10(Tetr)]	Stratagene, La Jolla, USA
XL-1 Blue MRF'	(mcrA) 183 (mcrCB-hsdSMR-mrr) 173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac [F' proAB laclq/ ZM15 Tn10(Tetr)]	Stratagene, La Jolla, USA

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2.11 Expressionsvektoren

Plasmid	Promoter	Säugetier	Selektionsmarker	Herkunft
			E. coli
pACC	CMV	-	Amp	Dr. Kolls, New Orleans, USA
pcDNA3.1	CMV	Neo	Amp	Invitrogen, Leek, Niederlande
pcDNA3.1-Zeo (+)	CMV	Zeo	Amp, Zeo	Invitrogen, Leek, Niederlande
pCMV-F105GPI	CMV	Neo	Amp	Si Chen, Boston, USA
pEGFP-N2	CMV	Neo	Amp, Kan	CLONTECH, Palo Alto, USA
pIRES-EGFP	CMV	Neo, EGFP	Amp	CLONTECH, Palo Alto, USA
pJM17	(Ad5 Helferplasmid)		Amp	Dr. Kolls, New Orleans, USA

2.12 Allgemeine Plastikwaren

Einwegpipetten	Greiner, Nürtingen
Pipettenspitzen (10 µl, 100 µl, 200 µl, 1 ml)	Greiner GmbH, Frickenhausen
Polypropylenröhrchen (15 ml, 50 ml)	Falcon, Oxnard, USA
Polystyrolröhrchen (10 ml),	Greiner GmbH, Frickenhausen
Reaktionsgefäße (0,5 ml, 1,5 ml, 2 ml)	Eppendorf, Hamburg

2.13 Sonstiges Verbrauchsmaterial

3MM-Whatman-Papier	Schleicher & Schuell, Dassel
Nitrozellulose-Membran	Schleicher & Schuell, Dassel
Röntgenfilm	Kodak, Chalon, Frankreich
Röntgenfilmentwicker und -fixierer	Kodak, Chalon, Frankreich
Sterilfilter (0,2 µm, 0,45 µm)	Schleicher & Schuell, Dassel

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2.14 Allgemein verwendetete Puffer

PBS

8 g NaCl

0,2 g KCl

1,44 g Na2HPO4

0,24 g KH2PO4

in 1 l Aqua dest., pH 7,4

DEPC Wasser

0,5 ml DEPC

ad 500 ml H₂O

schütteln und autoklavieren

50xTAE

2 M Tris-Base

0,05 M EDTA

mit Essigsäure auf pH 8,0

10× TBE

0,89 M Tris-Base

0,89 M Borsäure

0,02 M EDTA

DNA-Probenpuffer

5 ml Glycerol

1 ml 10× TBE

50 µl 10% Bromphenolblau

50 µl 10% Xylencyanol

4 ml H₂O

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2.15 Medien für die Kultur eukaryotischer Zellen

Keratinozytenmedium nach Green

1 mM	Natriumpyruvat
2 mM	L-Glutamin
100 U/ml	Penicillin
100 µg/ml	Streptomycin
5 µg/ml	Insulin
1 nM	Choleratoxin
0,4 µg/ml	Hydrocortison
10 ng/ml	Maus-EGF
10%	FKS
	in DMEM/HAM's F12 (3:1)

Medium für die Gemischte Lymphozytenkultur

2 mM	L-Glutamin
100 U/ml	Penicillin
100 µg/ml	Streptomycin
5 mM	-Mercaptoethanol
1 mM	\|[Lgr ]\|-\|[Ngr ]\|\|[Mgr ]\|\|[Mgr ]\|\|[Agr ]\|
10%	FKS
2%	autologes Serum
	in RPMI 1640

Medium für dden Zytotox-Test

2 mM	L-Glutamin
100 U/ml	Penicillin
100 µg/ml	Streptomycin
5 mM	-Mercaptoethanol
10%	FKS
	in RPMI 1640

Medium für die Kultur von OX-18 und F16-4-4-11 Zellen

2 mM	L-Glutamin
100 U/ml	Penicillin
100 µg/ml	Streptomycin
10%	FKS
	in RPMI 1640

41

2 mM	L-Glutamin
100 U/ml	Penicillin
100 µg/ml	Streptomycin
1 mM	Natriumpyruvat
10%	FKS
	in DMEM

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