Aus dem molekularbiologischen
Forschungslabor der HNO-Klinik und der
Klinik für Neonatologie – Campus Virchow Klinikum
der Medizinischen Fakultät Charité
der Humboldt-Universität zu Berlin

DISSERTATION

Hypoxie-induzierter Zelltod und
Veränderungen der HIF-1-Aktivität
in PC12-Zellen

Zur Erlangung des akademischen Grades
Doctor medicinae (Dr. med.)

vorgelegt der Medizinischen Fakultät Charité
der Humboldt-Universität zu Berlin

von
Herrn Nico Nawid Charlier


aus: Frankfurt am Main

Dekan: Prof. Dr. med. Joachim W. Dudenhausen

Gutachter:
1. Prof. Dr. med. J. Gross
2. Prof. Dr. med. W. Jelkmann
3. PD Dr. T. Kietzmann

Datum der Promotion: 09.02.2004

Inhaltsverzeichnis

• 1  Einleitung
  • 1.1 Hypoxie/Ischämie in der Perinatalperiode
  • 1.2 Mechanismen der ZNS-Schädigung durch Hypoxie/Ischämie
    • 1.2.1 Nekrose
    • 1.2.2 Apoptose
    • 1.2.3 Neuropathologische Formen der hypoxisch/ischämischen ZNS-Schädigung
    • 1.2.4 Langzeitschädigung des ZNS durch Hypoxie/Ischämie
  • 1.3 Faktoren, die den Zelltod beeinflussen
    • 1.3.1 Hypoxia inducible Factor 1
    • 1.3.2  Nervenwachstumsfaktor
      • 1.3.2.1 Nervenwachstumsfaktor und der Zelltod
      • 1.3.2.2 Nervenwachstumsfaktor und die Zellprotektion
    • 1.3.3 Einfluss von Temperatur auf den Zelltod
  • 1.4  Experimentelle Modelle in der Hypoxieforschung
    • 1.4.1 PC12-Zellen als Modell für neuronale Zellen
    • 1.4.2 Antisense HIF-1 alpha
    • 1.4.3 Methoden der Zelltodmessung
    • 1.4.4 Methoden der HIF-1 Bestimmung
• 2  Problemstellung
• 3  Material und Methoden
  • 3.1 Material
    • 3.1.1 Zellkulturgefäße
    • 3.1.2 Seren
    • 3.1.3 Zellkulturmedien
    • 3.1.4 Wachstumsfaktoren
    • 3.1.5 Antibiotika
    • 3.1.6  Puffer
    • 3.1.7 Substratlösung für photometrische Detektion
    • 3.1.8 Plasmide
    • 3.1.9 Kommerzielle Kits
  • 3.2 Methoden
    • 3.2.1 PC12-Zellen
    • 3.2.2 Kulturbedingungen
    • 3.2.3 Einfrieren und Auftauen von Zellen
    • 3.2.4 Zellzahlbestimmung
    • 3.2.5 Hypoxie
    • 3.2.6 Transfektion
    • 3.2.7 Reporterplasmide
    • 3.2.8 HIF-1 Berechnung
    • 3.2.9 Klonierung des Antisense-Konstruktes
    • 3.2.10 Messung der Luciferase
    • 3.2.11 Laktat Dehydrogenase im Medium
    • 3.2.12 Mitochondriale Dehydrogenase-Aktivität
    • 3.2.13 Durchflusszytometrie
      • 3.2.13.1 Analyse und Auswertung der Durchflusszytometrie
    • 3.2.14 Statistische Analyse
• 4  Ergebnisse
  • 4.1 Versuchsaufbau
  • 4.2 Hypoxie und der Zelltod
    • 4.2.1 LDH im Medium
    • 4.2.2 Mitochondriale Dehydrogenaseaktivität
    • 4.2.3 Durchflusszytometrische Analyse
      • 4.2.3.1 PC12-Zellen in Suspension
      • 4.2.3.2 PC12-Zellen in Suspension und mit NGF geprimt
      • 4.2.3.3  Adhärente PC12-Zellen auf Kollagen
      • 4.2.3.4 Adhärente PC12-Zellen auf Kollagen mit NGF
  • 4.3  Hypoxie und die HIF-1-Aktivität
    • 4.3.1 Transfektionseffizienz
    • 4.3.2 Transfektionsoptimierung
      • 4.3.2.1 Plasmidgehalt
      • 4.3.2.2 Lipidgehalt
      • 4.3.2.3 Zellzahl
    • 4.3.3 Effekte auf die Expression des Kontrollvektors pGL3
      • 4.3.3.1 Kontrollvektor pGL3 bei PC12-Zellen in Suspension und der Einfluss von NGF
      • 4.3.3.2 Kontrollvektor pGL3 bei adhärenten PC12-Zellen und der Einfluss von NGF
    • 4.3.4 HIF-1-Aktivität von PC12-Zellen, unmittelbar vor der Hypoxie transfiziert
    • 4.3.5  HIF-1-Aktivität von PC12-Zellen in Suspension und der Einfluss von NGF
    • 4.3.6 HIF-1-Aktivität von adhärenten PC12-Zellen und der Einfluss von NGF
  • 4.4 Antisense HIF-1 alpha
    • 4.4.1  Transfektionseffizienz der Antisense-Zelllinien
    • 4.4.2 Variabilität der HIF-1-Aktivität der Antisense-Zelllinie
    • 4.4.3  HIF-1-Aktivität der Zelllinien WT, CMV, 19P in Suspension
    • 4.4.4 HIF-1-Aktivität der Zelllinien WT, CMV, 19P adhärent auf Kollagen
    • 4.4.5  HIF-1-Aktivität der Zelllinien WT, CMV, 19P adhärent auf Kollagen mit NGF
    • 4.4.6 Antisense-Einzelzellklone
      • 4.4.6.1 HIF-1-Aktivität eines Antisense-Einzelzellklons
      • 4.4.6.2 Zelltod des Antisense-Einzelzellklons
  • 4.5 Einfluss der Temperatur
    • 4.5.1 Apoptose und Nekrose nach Hypoxieexposition
    • 4.5.2 Kontrollvektor pGL3 bei PC12-Zellen in Suspension und der Einfluss der Temperatur
    • 4.5.3 Abhängigkeit der HIF-1-Aktivität von der Temperatur
• 5  Diskussion
  • 5.1 Zelltod
    • 5.1.1 Einfluss von Hypoxie auf den Zelltod
    • 5.1.2 Einfluss von NGF auf den Zelltod
    • 5.1.3 Einfluss von Temperatur auf den Zelltod
  • 5.2 HIF-1-Aktivität
    • 5.2.1 Transfektionseffizienz
    • 5.2.2 Einfluss von NGF und Hypoxie auf den Kontrollvektor pGL3
    • 5.2.3 Einfluss von Temperatur auf den Kontrollvektor pGL3
    • 5.2.4 Einfluss von NGF auf die HIF-1-Aktivität und mögliche Mechanismen
    • 5.2.5  Einfluss von NGF auf die HIF-1-Aktivität bei Transfektion unmittelbar vor Hypoxie
    • 5.2.6 Einfluss der Temperatur auf die HIF-1-Aktivität
  • 5.3 HIF-1 alpha Antisense PC12-Zellen
  • 5.4 Beziehungen zwischen HIF-1-Aktivität und dem Zelltod
• 6  Zusammenfassung
• Verzeichnis der Abkürzungen
• Literaturverzeichnis
• Posterbeiträge / Publikationen
• Erklärung an Eides Statt
• Danksagung

Tabellen

• Tabelle 1: Einfluss von NGF auf die Expression des Kontrollvektor pGL3 in geprimten PC12-Zellen
• Tabelle 2: HIF-1-Aktivität (pHBE/pGL3) in KOLL-AD-Kulturen in den Zelllinien WT, CMV und 19P in Normoxie und nach 24 Stunden Hypoxieexposition
• Tabelle 3: HIF-1-Aktivität (pHBE/pGL3) in KOLL-AD-NGF-Kulturen in den Zelllinien WT, CMV und 19P in Normoxie und nach 24 Stunden Hypoxieexposition
• Tabelle 4: Durchflusszytometrie von PC12-Suspensionszellen in Normoxie und nach 72 Stunden Hypoxie in 32°C, 36°C und 42°C.
• Tabelle 5: Einfluss der Temperatur auf die Expression des Kontrollvektors pGL3 in PC12-Zellen in Suspension.

Bilder

• Abbildung 1: Schematische Darstellung der Folgen einer perinatalen Hypoxie/Ischämie. Kaskade von biochemischen Mechanismen, welche zur Störung der zellulären Funktion oder zum Zelltod führen (Chen, 1997, modifiziert).
• Abbildung 2: Struktur von HIF-1 alpha. Die Sequenz beginnt mit der Helix-Loop-Helix (bHLH). Anschließend folgt die PAS Domäne mit den zwei hydrophoben repetitiven Sequenzen, die als Untereinheiten A und B bezeichnet werden. Im C-Terminus liegen zwei Transaktivierungsdomänen (TAD), die durch eine inhibitorische Domäne (ID) voneinander getrennt sind, und die sauerstoffabhängige Degradationsdomäne (ODD), die mit einer der Transaktivierungsdomänen und einem Teil der inhibitorischen Domäne überlappt (Stein, 2000).
• Abbildung 3: Kontrollplasmid pGL3 und der Hypoxie sensitive Vektor pHBE. Im Enhancerbereich des SV40 Promotors sind drei HIF-1 Bindungsstellen einkloniert. Durch Bindung des HIF-1 an die HBE (HIF Binding Element)-Stellen wird die Luciferase luc+ vermehrt exprimiert (Leclere, 2002).
• Abbildung 4: Transfektionsreagenz TransFast (Promega, Mannheim)
• Abbildung 5: PC12-Zellen am Tag 2 nach Aussaat in einer 24-Kavitätenplatte. a) Die Zellen wachsen in lockeren Aggregaten und haften nicht an der Kavitätenoberfläche (200-fache Vergrößerung). b) PC12-Zellen auf Kollagen. Die Zellen wachsen adhärent als Monolayer und fangen an kleine Neuriten zu bilden (400-fache Vergrößerung). c) PC12-Zellen auf Kollagen mit NGF. Die Zellen wachsen adhärent als Monolayer und bilden viele Neurite aus (400-fache Vergrößerung).
• Abbildung 6: Versuchsablauf. Am Tag 0 wurden die Kulturen den jeweiligen Versuchsbedingungen ausgesetzt: SUS, SUS-NGF, KOLL-AD und KOLL-AD-NGF. Zu jedem Versuch wurde parallel eine Kontrollgruppe angesetzt, die sich lediglich durch die fehlende Hypoxieexposition unterschied.
• Abbildung 7: LDH-Aktivität im Medium nach 36 Stunden Hypoxie bei PC12-Zellen in Suspension (SUS), adhärenten Zellen auf Kollagen (KOLL-AD) und adhärenten Zellen mit NGF (KOLL-AD-NGF). Die Daten stellen die Mittelwerte ± SEM dar. n = 4 unabhängige Versuche. Die LDH-Aktivität ist in mU/ml angegeben. * = p<0,01 im Vergleich zu Normoxie. # = p< 0,01 im Vergleich zu KOLL-AD-NGF-Kultur.
• Abbildung 8: Dehydrogenase-Aktivität („EZ4U“) in Normoxie und nach 36 Stunden Hypoxieexposition bei PC12-Zellen in Suspension (SUS), adhärenten Zellen auf Kollagen (KOLL-AD) und adhärenten Zellen auf Kollagen mit NGF (KOLL-AD-NGF). Die dargestellten Daten sind Mittelwert ± SEM. n=8 unabhängige Versuche. * = p< 0,01 im Vergleich zu Normoxie der jeweiligen Kultur. # = p<0,01 im Vergleich zu Normoxie SUS.
• Abbildung 9: Punktehistogramm von PC12-Suspensionszellen. a) in Normoxie und b) nach 36 Stunden Hypoxie. Dargestellt ist ein exemplarischer Versuch mit einer Doppelfärbung mit Annexin-V und PI. FL1-H stellt die grüne Fluoreszenz (ANN) dar und FL2-H die rote Fluoreszenz (PI).
• Abbildung 10: Punktehistogramm von PC12-Suspensionszellen nach 72 Stunden Hypoxie. Dargestellt ist ein exemplarischer Versuch mit einer Doppelfärbung mit Annexin-V und PI. FL1-H stellt die grüne Fluoreszenz (ANN) dar, FL2-H die rote Fluoreszenz (PI).
• Abbildung 11: PC12-Zellen in Suspension in Normoxie und nach 72 Stunden Hypoxieexposition. Durchflusszytometrische Analyse mit Doppelfärbung von Propidium-Jodid (PI) und Annexin-V. Die dargestellten Werte sind Mittelwerte ± SEM in Prozent. n = 3 unabhängige Versuche. * = p< 0,01.
• Abbildung 12: Punktehistogramm von PC12-Suspensionszellen, die mit NGF geprimt wurden (2500 ng/ml). a) In Normoxie und b) nach einer Hypoxieexposition von 36 Stunden. Dargestellt ist ein exemplarischer Versuch mit einer Doppelfärbung mit Annexin-V und PI. FL-III stellt die grüne Fluoreszenz (ANN) dar und FL-I die rote Fluoreszenz (PI). Die Analyse der Zellen erfolgte mit dem Galaxy FlowSystems von DAKO und wurde mit FlowMax-Software ausgewertet.
• Abbildung 13: Geprimte PC12-Zellen mit 2500 ng/ml NGF in Normoxie und nach 36 Stunden Hypoxieexposition. Durchflusszytometrische Analyse bei einer Doppelfärbung mit Propidium-Jodid (PI) und Annexin-V. Die dargestellten Werte sind Mittelwerte ±SEM in Prozent. n=3 unabhängige Versuche. * = p< 0,01.
• Abbildung 14: Punktehistogramm von adhärenten PC12-Zellen auf Kollagen (KOLL-AD). a) In Normoxie und b) nach einer Hypoxieexposition von 36 Stunden. Dargestellt ist ein exemplarischer Versuch mit einer Doppelfärbung mit Annexin-V und PI. FL1-H stellt die grüne Fluoreszenz (ANN) dar und FL2-H die rote Fluoreszenz (PI).
• Abbildung 15: Adhärente PC12-Zellen auf Kollagen (KOLL-AD) in Normoxie und nach 36 Stunden Hypoxieexposition. Durchflusszytometrische Analyse mit Doppelfärbung von Propidium-Jodid und Annexin-V. Die dargestellten Werte sind Mittelwerte ± SEM in Prozent. n=3 unabhängige Versuche. * = p< 0,01.
• Abbildung 16: Punktehistogramm von adhärenten PC12-Zellen auf Kollagen mit NGF (2500 ng/ml) (KOLL-AD-NGF). a) In Normoxie und b) nach einer Hyoxieexposition von 36 Stunden. Dargestellt ist ein exemplarischer Versuch mit einer Doppelfärbung mit Annexin-V und PI. FL1-H stellt die grüne Fluoreszenz (ANN) dar, FL2-H die rote Fluoreszenz (PI).
• Abbildung 17: Adhärente PC12-Zellen auf Kollagen mit NGF in Normoxie und nach 36 Stunden Hypoxieexposition. Durchflusszytometrische Analyse bei einer Doppelfärbung mit Propidium-Jodid und Annexin-V. Dargestellt sind Mittelwerte ± SEM in Prozent. n = 3 unabhängige Versuche. * = p< 0,01
• Abbildung 19: Abhängigkeit der luminometrischen Aktivität vom Plasmidgehalt. Dargestellt sind die RLE-Absolutwerte der einzelnen Vektoren in Kontrolle und nach 24 Stunden Hypoxieexposition. Die verwendeten Plasmidmengen sind: 0,1 µg, 0,5 µg, 1,5 µg und 3 µg Plasmid/Kavität, RLE = Relative luminometrische Einheit.
• Abbildung 20: Abhängigkeit der HIF-1 Aktivität vom Plasmidgehalt. Dargestellt ist der Quotient pHBE/pGL3 in Normoxie und nach 24 Stunden Hypoxieexposition. Die verwendeten Plasmidmengen sind: 0,1 µg, 0,5 µg, 1,5 µg und 3 µg Plasmid/Kavität.
• Abbildung 21: Abhängigkeit der luminometrischen Aktivität von der Lipidkonzentration. Dargestellt sind die Absolutwerte der einzelnen Vektoren in Kontrolle und nach 24 Stunden Hypoxieexposition. Die verwendeten Lipidmengen sind: 4 µl Lipid/Kavität, 6 µl Lipid/Kavität und 12 µl Lipid/Kavität.
• Abbildung 22: Abhängigkeit der HIF-1-Aktivität von dem Lipidgehalt. Dargestellt ist der Quotient pHBE/pGL3 in Normoxie und nach Hypoxieexposition. Die verwendeten Lipidmengen sind: 4 µl Lipid/Kavität, 6 µl Lipid/Kavität und 12 µl Lipid/Kavität.
• Abbildung 23: Luminometrische Aktivität bei unterschiedlicher Zellzahl/Kavität. Dargestellt sind die Absolutwerte der einzelnen Vektoren in Kontrolle und Hypoxie. Gewählt wurde folgende Zellzahl/Kavität: 50000 Zellen, 100000 Zellen, 200000 Zellen und 600000 Zellen. Leerwert = 0,1 RLE.
• Abbildung 24: HIF-1-Aktivität bei unterschiedlicher Zellzahl/Kavität. Dargestellt ist der Quotient pHBE/pGL3 in Normoxie und nach 24 Stunden Hypoxieexposition. Gewählt wurden folgende Zellzahl/Kavität: 50000 Zellen, 100000 Zellen, 200000 Zellen und 600000 Zellen.
• Abbildung 25: Luminometrische Aktivität des pGL3-Vektors bei PC12-Zellen in Suspension (SUS) und bei adhärenten PC12-Zellen mit NGF (KOLL-AD-NGF) in Normoxie. Dargestellt ist die Anzahl der Versuche, die jeweils in einen definierten RLE-Bereich fallen (0-50, 50-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300 und 300-350). Die Zellen wurden am Tag 0 ausgesät und am Tag 2 transfiziert. Die KOLL-AD-NGF-Kultur wurde mit 500 mg/ml NGF ausgesät.
• Abbildung 26: Luminometrische Aktivität des pGL3-Vektors bei PC12-Zellen in Suspension und bei adhärenten PC12-Zellen nach 24 Stunden Hypoxieexposition. Dargestellt ist die Anzahl der Versuche, die jeweils in einen definierten RLE-Bereich fallen (0-50, 50-100, 100-150, 150-200, 200-250, 250-300 und 300-350). Die Zellen wurden am Tag 0 ausgesät und am Tag 2 transfiziert. Die KOLL-AD-NGF-Kultur wurde mit 500 mg/ml NGF ausgesät.
• Abbildung 27: Versuchsablauf der PC12-Kulturen SUS, KOLL-AD und KOLL-AD-NGF. Zu einer Kultur unter hypoxischen Bedingungen wurde parallel eine Kontrollgruppe in Normoxie angesetzt.
• Abbildung 28: HIF-1-Aktivität in den drei Zellkulturen Suspension (SUS), adhärente Zellen auf Kollagen (KOLL-AD) und adhärente Zellen auf Kollagen mit NGF (KOLL-AD-NGF). * = p<0,01 im Unterschied zur Normoxie. n=15 unabhängige Versuche in Suspension (SUS) und n=5 bei adhärenten Zellen (KOLL-AD) und adhärenten Zellen mit NGF (KOLL-AD-NGF). Hypoxiedauer = 24 Stunden. NGF-Konzentration = 500 ng/ml.
• Abbildung 29: HRE abhängige Luciferase-Aktivität (pHBE-pGL3/pGL3). Dargestellt sind PC12-Zellen in Normoxie und nach 24 Stunden Hypoxieexposition in SUS, KOLL-AD, KOLL-AD-NGF. Ausgewertet wurden die Versuche der Abbildung 28. * = p<0,01 und ** = p<0,001 im Vergleich zur Normoxie.
• Abbildung 30: Versuchsablauf der PC12-Zellen geprimt mit unterschiedlichen Konzentrationen von NGF. Zu jedem Versuch wurde parallel noch eine Kontrollgruppe angesetzt, die sich lediglich durch die fehlende Hypoxieexposition unterschied.
• Abbildung 31: Mit NGF geprimte PC12-Zellen in Suspension in Normoxie und nach 24 Stunden Hypoxie. Verwendete NGF-Konzentrationen sind 0 ng/ml , 100 ng/ml , 500 ng/ml und 2000 ng/ml NGF. n=6 unabhängige Versuche, dargestellt mit dem Mittelwert ± SEM. # = p < 0,01 im Vergleich zu 0 ng/ml NGF. * = p < 0,01 im Vergleich zur Normoxie.
• Abbildung 32: Versuchsablauf der Transfektion von PC12-Zellen im Pool und anschließender Aussaat auf Kollagen (KOLL-AD) und auf Kollagen mit NGF (KOLL-AD-NGF). Zu jedem Versuch wurde parallel noch eine Kontrollgruppe angesetzt, die sich lediglich durch die fehlende Hypoxieexposition unterschied.
• Abbildung 33: Adhärente PC12-Zellen auf Kollagen (KOLL-AD) und auf Kollagen mit NGF (KOLL-AD-NGF), im Pool transfiziert. Dargestellt ist die HIF-1-Aktivität in Normoxie und nach 24 Stunden Hypoxieexposition. n = 3 unabhängige Versuche. Dargestellt sind die Mittelwerte ± SEM. * = p<0,01 im Unterschied zur Normoxie. # = p< 0,001 im Vergleich zu KOLL-AD.
• Abbildung 34: Expression von pGFP der Zelllinien CMV, 19P und 19T. Dargestellt ist der prozentuale Anteil der mit pGFP transfizierten Zellen im Vergleich zum Wildtyp (= 100%). 19P und 19T als transgene PC12-Zelllinien mit Antisense-Konstrukt und die Zelllinie CMV als transgene Zelllinie ohne Antisense-Konstrukt. n = 4, Mittelwert ± SEM.
• Abbildung 35: HIF-1-Aktivität von verschiedenen Passagen der 19P Antisense-Zelllinie nach 24 Stunden Hypoxieexpoxition. Dargestellt sind 10 verschiedene Versuche, der Größe nach sortiert.
• Abbildung 36: Die HIF-1-Aktivität (pHBE/pGL3) in den Zelllinien WT, CMV und 19P in Normoxie und nach 24 Stunden Hypoxieexposition. Dargestellt ist der Mittelwert von n=10 mit SEM. * = p < 0,01 im Vergleich zur Normoxie.
• Abbildung 37: HIF-1-Aktivität (pHBE/pGL3) in den Zelllinien WT, CMV und dem Einzelzellklon
• Abbildung 38: Punktehistogramm von PC12-Zellen der Kontrollzelllinie CMV in Suspension. a) Normoxie und b) nach einer Hypoxieexposition von 72 Stunden. Dargestellt ist ein exemplarischer Versuch mit einer Doppelfärbung mit Annexin-V und PI. FL1 stellt die grüne Fluoreszenz (ANN) dar und FL2 die rote Fluoreszenz (PI).
• Abbildung 39: Punktehistogramm von PC12-Zellen des Antisense-Subklons 19P/5 in Suspension in Normoxie a) und nach einer Hypoxieexposition von 72 Stunden b). Dargestellt ist ein exemplarischer Versuch mit einer Doppelfärbung mit Annexin-V und PI. FL1 stellt die grüne Fluoreszenz (ANN) dar und FL2 die rote Fluoreszenz (PI).
• Abbildung 40: Versuchsaufbau der PC12-Zellen mit unterschiedlicher Temperaturexposition. Die PC12-Zellen wurden in Suspension ausgesät und am Tag 2, unmittelbar vor der Hypoxie, transfiziert. Anschließend wurden die Zellen bei der jeweiligen Temperatur inkubiert. Die Hypoxiedauer betrug 36 Stunden. Zu jedem Versuch wurde eine Kontrollgruppe angesetzt, die sich lediglich durch die fehlende Hypoxieexposition unterschied.
• Abbildung 41: Dargestellt ist die HIF-1-Aktivität in PC12-Zellen nach Hypoxieexposition bei unterschiedlichen Temperaturen in Normoxie und nach 24 Stunden Hypoxie. n=7, Mittelwert ± SEM. * = p < 0,01 im Vergleich zu Normoxie. # = p<0,01 im Vergleich zu 32°C und 36°C.
• Abbildung 42: Dargestellt ist die Beziehung zwischen HIF-1-Aktivität (Hypoxie/Normoxie) und Zelltod (Hypoxie/Normxie). Die Daten der HIF-1-Aktivität und des Zelltodes entstammen den verschiedenen Differenzierungsgraden (SUS, KOLL-AD, KOLL-AD-NGF) und den verschiedenen Temperaturen (32°C, 36°C und 42°C). Die Daten sind eine Zusammenfassung der Versuche zur Analyse des Zelltodes und der HIF-1-Aktivität der verschiedenen PC12-Phänotypen.
• Abbildung 43: Schematische Zusammenfassung der Interaktion von Hypoxie/Ischämie, HIF-1, p53 und bcl-2. Hypoxie/Ischämie führt zu einer HIF-1 Aktivierung. Dargestellt sind die in der Literatur beschriebenen Interaktionen von HIF-1 mit verschiedenen Faktoren, die entweder zum apoptotischen Zelltod oder zu einer Zellprotektion führen.