Hanay, Christiane: Optimierung von Kupplungsverfahren für die Peptidsegmentkondensation

I

9. Anhang

Spektroskopische Daten

Tab. 12: 13C-chemische Verschiebungen in ppm der Reaktion von Mesitylencarbonsäurechlorid mit Bipyrrolidinoharnstoff und SbCl5 bei -50°C, -5°C und 20°C, gemessen in CD2Cl2 (0,4 M), und Signale von Vergleichsspektren

-50°C

-5°C

20°C

isolierte O-Acyl- uroniumverbindung

(Kapitel 7.4.)

Mesitylencarbonsäure-chlorid, -50°C

Mesitylencarbonsäure,

20°C

Bipyrrolidino-

harnstoff, -50°C

Bipyrrolidinoharnstoff · SbCl5,

-50°C

170,1 (Cl)




170,6 (COCl)

176,1 (COOH)



161,6 (CO)

161,5

162,2

162,1



160,8 (C=O)


155,2







156,1 (CO)

152,1 (C+)

152,4

153,3

153,2





144,2 (Cq)

144,2

144,9

144,8





140,7 (Cl)




140,7 (Cq)

140,6 (Cq)



140,3 (2Cq)

140,1

140,9

140,8





135,1 (Cl)




135,3 (Cq)

136,4 (2Cq)



132,5 (Cl)




132,6 (2Cq)




130,2 (2CHarom)

130,2

131,0

130,9


129,7 (Cq)



128,6





129,0 (2CHarom)



128,1 (Cl)

128,1 (s)



128,1 (2CHarom)




121,6 (Cq)

121,7

122,5

122,5





51,4 (2CH2N)

51,4

52,3

51,5




51,3 (2CH2N)

50,7 (2CH2N)

50,7

51,6

50,4




50,7 (2CH2N)

48,8

49,5

50,5




47,6 (4CH2N)


25,8 (2CH2)

25,7

26,5

25,4



25,2 (4CH2)

25,7 (2CH2)

23,7 (2CH2)

23,6

24,3

24,2




24,0 (2CH2)

22,5 (2CH3)

22,1

22,7

22,6





21,0 (1CH3)

20,7

21,4

21,3


21,2 (1CH3)



20,8 (Cl)




20,3 (1CH3)

20,3 (2CH3)



19,9








19,2 (Cl)

19,0 (s)



19,2 (2CH3)




(s) klein; (Cl) Mesitylencarbonsäurechlorid; fett gedruckt sind Signale von Mesit(Py)2+ SbCl6-


II

Tab. 13: 13C-chemische Verschiebungen in ppm der Aktivierung von Mesitylencarbonsäure mit HAPyU in Gegenwart von Collidin bei -50°C, -5°C und 20°C, gemessen in CD2Cl2 (0,4 M), und Signale von Vergleichsspektren

-50°C

-5°C

20°C

Mesit-OAt-Ester,

-5°C

Mesit-OAt-Ester, 20°C ( APT )

HAPyU + Collidin,

-50°C

Collidin,

-50°C

Collidin,

20°C

Collidin+PF6-,

20°C

MesitOH + Collidin, -50°C

MesitOH + Collidin, 20°C

175,3 (MesitOH/Collidin) (s)









174,3 (COO-)

173,9

165,5 (OAt)

165 7

165,7 (OAt)

165,8 (CO)

165,9







162,0 (CO)

162,0 (ss)










160,8 (Harnstoff)

160,9

160,9






160,4 (Cq)



154,5 (MesitOH/Collidin)

157,4 (Collidin)

158,1



156,4 (Collidin)

157,0

157,8 (2Cq)


154,8 (Collidin+)

156,3

153,6 (C+)












153,0 (Collidin+PF6-)

152,9






152,9 (2Cq)



152,1 (OAt)

152,3 (OAt)

152,1 (OAt)

152,2 (CHoat)

152,2





151,8 (Collidin+)

151,1

149,7 (HAPyU/Collidin)

149,9 (s)




149,4 (CH)






148,5 (HAPyU/Collidin)

148,8 (s)




147,9 (Collidin)

147,4

147,7 (Cq)




144,4 (HAPyU/Collidin)

144,9 (ss)




144,2 (C+)






144,1 (Cq)

144,2 (ss)










142,4 (OAt)

142,5

142,5 (OAt)

142,6 (Cq)

142,6

141,9 (Cq)






141,7 (OAt)

140,5

141,0 (OAt)

140,6 (Cq)

140,5







140,3 (2Cq)











137,3 (OAt)

137,5

137,4 (OAt)

137,6 (2Cq)

137,8







136,8 (MesitOH/Collidin)









137,0 (Cq)

138,0

134,9 (OAt)

135,0

135,0 (OAt)

135,2 (Cq)

135,3







134,7 (MesitOH/Collidin)









135,1 (Cq)

134,8

132,5 (MesitOH/Collidin)









132,9 (Cq)

134,1

130,4 (2CHarom)

130,6 (s)










129,3 (OAt)

129,4

129,3 (OAt)

129,5 (CHoat)

129,6







128,8 (OAt)

129,0

129,0 (OAt)

129,1 (2CHarom)

129,2







128,1 (HAPyU/Collidin)





127,8 (CH)






127,5 (MesitOH/Collidin)









127,5 (2CHarom)

128,3

125,8 (HAPyU/Collidin)

124,9

125,1 (OAt)

124,2 (Cq)

124,6

125,7 (Cq)



125,8 (2CHarom)



123,7 (HAPyU/Collidin)





123,4 (CH)






122,2 (Cq)









122,8 (Collidin+)

122,8

121,2 (OAt)

121,3

121,2 (OAt)

121,2 (CHoat)

121,2

120,9 (Collidin)

120,8

121,2 (2CHarom)




119,4 (HAPyU/Collidin)

119,9 (s)




117,4






51,4 (2CH2N)

51,7 (s)




53,1 (2CH2N)






50,5 (2CH2N)

50,8 (s)




51,3 (2CH2N)






47,9 (Harnstoff)

48,3

48,3









25,9 (2CH2)

26,1 (s)




25,8 (2CH2)






25,3 (Harnstoff)

25,5

25,5









24,2 (HAPyU/Collidin)

24,3 (ss)




24,0 (Collidin)

23,9

24,3 (2CH3)




23,8 (2CH2)

24,0 (ss)




23,0 (2CH2)






22,2 (2CH3)

22,3 (ss)







22,2 (1CH3)



21,2 (OAt)

21,6

21,6 (OAt)

21,3 (1CH3)

21,4





21,2 (2CH3)

22,2

21,0 (MesitOH/Collidin)

21,2

21,1







21,0 (Collidin+)

21,2

20,7 (1CH3)









20,8 (1CH3)


20,3 (OAt)

20,2

20,0 (OAt)

20,3 (2CH3)

20,3

20,1 (Collidin)

20,5

20,8 (1CH3)




19,3 (MesitOH/Collidin)

19,9

19,7






19,4 (2CH3)

19,3 (Collidin+)

19,7

(s) klein; (ss) sehr klein; (OAt) Mesitylencarbonsäure- OAt -Ester; (Harnstoff) Bipyrrolidinoharnstoff; fett gedruckt sind Signale von Mesit(Py)2+ PF6-


III

Tab. 14: 13C-chemische Verschiebungen in ppm der Aktivierung von Mesitylencarbonsäure mit 1-(1-Pyrrolidinyl-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridin-1-ylmethylen)pyrrolidiniumhexachloroantimonat-N-Oxid ( Abb. 12 , 19b, Kapitel Mesitylencarbonsäure-Aktivierung als Modell zum Nachweis der O-Acyluroniumverbindung ) in Gegenwart von 1 Äq. Collidin bei -50°C, -5°C und 20°C, gemessen in CD2Cl2 (0,4 M), (siehe Abb. 13 ) und 19b/Collidin zum Vergleich

-50°C

-5°C

20°C

19b + Collidin

(CD2Cl2/CD3CN), -50°C

174,4 (MesitOH/Collidin)




161,8 (CO)

161,2 (ss)



154,4 (C+)

154,3


156,5 (Collidin)



152,8 (Collidin+PF6-)


152,2 (OAt)

152,2 (OAt)

152,3 (OAt)


148,3 (19b/Collidin)



149,3 (CH)




147,2 (Collidin)

144,3 (Cq)




142,5 (OAt)


142,5 (OAt)




140,0 (OAt)


140,3 (2Cq)

140,7 (ss)



137,3 (OAt)

137,5

137,7 (OAt)


136,8 (MesitOH/Collidin)




135,3 (OAt)

135,5

135,2 (OAt)


134,8 (MesitOH/Collidin)




132,6 (MesitOH/Collidin)

133



130,4 (2CHarom)

130,7



129,4 (OAt)

129,4

129,5 (OAt)


128,7 (OAt)

129,0

129,2 (OAt)


127,3 (MesitOH/Collidin)

127,9


127,6 (CH)



125,7 (OAt)



123,7 (19b/Collidin)


123,5 (CH)

122,9 (Cq + 19b/Collidin)




121,3 (OAt)

121,2

121,3 (OAt)

120,5 (Collidin)

119,1 (19b/Collidin)

119,5






117,3

51,4 (2CH2N)

51,9


52,6 (2CH2N)

50,7 (2CH2N)

51,2


51,2 (2CH2N)

47,7 (Harnstoff)

48,1

48,5


25,9 (2CH2)

26,2


25,7 (2CH2)

25,3 (Harnstoff)

25,5

25,7


23,8 (2CH2)

24,1


24,0 (Collidin)

22,5 (2CH3)

22,6

22,1

23,2 (2CH2)

21,0 (OAt)

21,4

21,4 (OAt)


20,7 (1CH3)

20,9



20,2 (OAt)

20,2

20,3 (OAt)


19,2 (MesitOH/Collidin)

19,5

19,9

19,9 (Collidin)

(ss) sehr klein; (OAt) Mesitylencarbonsäure- OAt -Ester; (Harnstoff) Bipyrrolidinoharnstoff; fett gedruckt sind Signale von Mesit(Py)2+ SbCl6-


IV

Tab. 15: 13C-chemische Verschiebungen in ppm der Aktivierung von Mesitylencarbonsäure mit HAPyU in Gegenwart von Collidin bei Raumtemperatur, gemessen in CD2Cl2 (0,4 M)

Zeit (min): 2,5

10

20

40

60

120


165,4 (OAt)

165,9

165,8

165,9

165,8

161,1 (Harnstoff)

161,0

161,1

161,1

161,1

161,1


159,4 (Collidin+PF6-)

159,4

159,5

159,6

159,6

152,8

152,6 (Collidin+PF6-)

152,6

152,6

152,6

152,6

152,3 (OAt)

152,2

152,3

152,3

152,3

152,3

142,6 (OAt)


142,6

142,6

142,6

142,6




140,9 (OAt)

140,9

140,9

137,6 (OAt)

137,6

137,6

137,6

137,6

137,6


136,4

136,4

136,4

136,4

136,4

135,3 (OAt)


135,2

135,2

135,2

135,2

129,5 (OAt)

129,4

129,4

129,4

129,4

129,4

129,2 (OAt)

129,2

129,2

129,2

129,2

129,2

125,5 (Collidin+PF6-)

125,6

125,7

125,7

125,7

125,7




124,4 (OAt)

124,4

124,4

121,3 (OAt)

121,3

121,3

121,3

121,3

121,3

48,4 (Harnstoff)

48,4

48,4

48,4

48,4

48,4

25,6 (Harnstoff)

25,6

25,6

25,6

25,6

25,6

21,8 (Collidin+PF6-)

21,9

21,9

21,9

21,9

21,9

21,2 (OAt)

21,2

21,2

21,2

21,3

21,2

20,2 (OAt)

20,2

20,2

20,2

20,2

20,2

19,5 (Collidin+PF6-)

19,5

19,4

19,4

19,4

19,4

(OAt) Mesitylencarbonsäure- OAt -Ester; (Harnstoff) Bipyrrolidinoharnstoff


V

Tab. 16: IR -Absorptionsbanden in cm-1 der Z -Gly-Ala-Aktivspezies, zusammengestellt aus den kinetischen Messungen

Verbindung

C=O

Urethan-Carbonyl

C=N

Z-Gly-Ala-OHa

1660

1728

1564

Z-Gly-Ala-OH/DIEAb

1671

1723

1608

Z-Gly-Ala-Oxazolonb

1828

1728

1683

Z-Gly-Ala-OBt-Esterc

1810

1721

1655

Z-Gly-Ala-OAt-Esterd

1820

1724

1693

Z-Gly-Ala-ONB-Esterb,e

1819

1739

1697

Z-Gly-Ala-ONSu-Esterf,g

1816

1746

1697

Z-Gly-Ala-Fh

1847

1725

1690

a Die Daten wurden unter Verwendung der KBr-Preßtechnik erhalten.

b IR -Analyse erfolgte in 0,1 M DCM -Lösungen unter Verwendung einer NaCl-Küvette.

c IR -Analyse in 0,1 M DCM -Lösung (NaCl-Küvette) und als KBr-Preßling lieferten analoge Spektren. Kein Hinweis auf die N-acylierte Form des OBt -Esters konnte mittels IR beobachtet werden.

d IR -Analyse erfolgte in 0,1 M DCM / THF -Lösung (NaCl-Küvette).

e Eine weitere Carbonylbande des ONB -Restes wurde bei 1781 cm-1 beobachtet.

f IR -Analyse erfolgte in 0,1 M THF -Lösung (NaCl-Küvette).

g Eine weitere Carbonylbande des ONSu -Restes wurde bei 1790 cm-1 beobachtet.

h IR -Analyse erfolgte in 0,1 M DCM /Dioxan-Lösung (NaCl-Küvette).


VI

Tab. 17: 1H- NMR -spektroskopische Daten der Z -Gly-Ala-Aktivspezies, die während der verschiedenen kinetischen Messungen auftreten, aufgenommen in CD2Cl2/ DMF -d7, die chemischen Verschiebungen sind in ppm zusammen mit der Linienform und der Nummer der Protonen angegeben

Verbindung

CH3

(Ala)

CH2

(Gly)

CH

(Ala)

CH2

(Z)

Phenylprotonen

NH

(Gly)

NH

(Ala)

Andere

Z-Gly-Ala-OHa

1,36 d (3)

3,83 d (2)

4,43 quin (1)

5,13 s (2)

7,30-7,45 m (5)

7,15 t (1)

7,92 d (1)


Z-Gly-Ala-OH/DIEA

1,35 d (3)

3,82 d (2)

4,20 quin (1)

5,15 s (2)

7,35-7,45 m (5)

7,52 t (1)

7,85 d (1)

DIEA: 1,1-1,45 d (12) 2(CH3)2 + t (3) CH3;

2,95 quart (2) CH2; 3,49 hept (2) 2CH

Z-Gly-Ala-Oxazolona,b

1,39 d (3)

4,16 dd (2)

4,35 quart (1)

5,17 s (2)

7,35-7,45 m (5)

7,58 t (1)

-


Z-Gly-Ala-OBt-Estera,b,c

1,67 d (3)

3,94 d (2)

4,82 quin (1)

5,13 s (2)

7,30-7,45 m (5)

7,34 t (1)

8,96 d (1)

8,36 d (1); 8,02 d (1); 7,88 t (1); 7,67 t (1)d

8,05 d (1); 7,77 (1); 7,58 (1); 7,47 t (1)e

vermutlich der N-Acyl-OBt-Estera

1,58 d (3)

3,90 d (2)

5,36 quin (1)

5,12 s (2)

7,30-7,45 m (5)

7,16 t (1)

8,62 d (1)

7,92; 7,69; 7,49; 7,38f

Z-Gly-Ala-OAt-Esterb,c

1,74 d (3)

3,93 dd (2)

5,05 quin (1)

5,15 s (2)

7,30-7,47 m (5)


8,87 d (1)

7,55 dd; 7,7 dd; 8,47 d; 8,65 d; 8,8 d; 8,9 dg

Z-Gly-Ala-ONB-Esterb

1,50 d (3)

3,85 dd (2)

4,76 quin (1)

5,09 s (2)

7,30-7,45 m (5)

7,28 t (1)

8,58 d (1)

1,62h; 3,31-3,58i; 3,3h; 6,05 s 2CHolefinh; 6,14 s 2CHolefini; 10,83h

Z-Gly-Ala-F (CD2Cl2)b

1,47 d (3)

3,89 d (2)

4,58 quin (1)

5,09 s (2)

7,23-7,4 m (5)


8,62 d (1)


a aus einem TOCSY 1H- NMR -Experiment erhalten (siehe Kapitel Untersuchungen zur Ringöffnung des Oxazolons , Abb. 18 )

b in situ gemessen, enthält geringfügige Reste von Ausgangspeptid

c Verunreinigung von Oxazolon

d Signale des O-Acyl- OBt -Esterteils

e Signale von HOBt

f vermutlich aromatische CH-Protonen des N-Acyl- OBt -Esters

g Signale des OAt -Esters oder von freiem HOAt

h Signale von freiem HONB

i Signale des ONB -Esterrestes


VII

Tab. 18: 13C- NMR chemische Verschiebungen in ppm der Z -Gly-Ala-Aktivspezies bei verschiedenen kinetischen Messungen, aufgenommen in CD2Cl2/ DMF -d7

Verbindung

CH3

(Ala)

CH2

(Gly)

CH

(Ala)

CH2

(Z)

CHphenyl

Cq

CO

Andere

Z-Gly-Ala-OH ( APT )

17,6

44,1

48,2

66,1

128,1; 128,1; 128,7

137,8

157,2; 169,5; 174,4


Z-Gly-Ala-OH/DIEA

18,9

44,7

49,8

66,2

128,1; 128,2; 128,9

137,9

157,3; 168,8; 175,4

DIEA: 13,9 (CH3), 18,8 2(CH3)2;

40,8 (CH2); 51,7 (2CH)

Z-Gly-Ala-Oxazolon ( APT )

16,5

39,2

60,6

66,6

128,2; 128,3; 128,9

137,6

157,2; 160,1; 179,7


Z-Gly-Ala-OBt-Ester

16,5

44,1

47,8

66,4

128,2; 128,3; 128,8

137,6

157,1; 170,3; 171,0

110,0; 119,5; 120,1; 124,8;

125,8; 143,7a

Z-Gly-Ala-OAt-Ester

17,3

44,4

47,4

66,7

128,4; 129,0; 129,2

138,0

157,5; 170,1; 171,0

121,1; 122,2; 130,2; 151,5; 153,1b

Z-Gly-Ala-ONB-Ester ( APT )

17,5

44,2

46,5

66,4

128,2; 128,8

137,9

157,3; 170,0; 170,4

42,7 (2CH); 45,0 (2CH); 51,5 (CH2); 135,2 (2CHolefin); 173,3 (2CO)c

a Signale des OBt -Esterteils oder von freiem HOBt

b Signale des OAt -Esterteils oder von freiem HOAt

c Signale des ONB -Esters oder von freiem HONB


VIII

Tab. 19: 1H- NMR und 13C- NMR chemische Verschiebungen in ppm verschiedener Referenzverbindungen, die im Verlauf der Aktivierungsreaktionen verwendet wurden

TBTU: 1H-NMR (DMF-d7)

13C-NMR (DMF-d7)

3,25 (s, 6, 2CH3); 3,63 (s, 6, 2CH3); 7,75 (t, 1, CH); 7,80 (d, 1, CH); 8,01 (t, 1, CH); 8,12 (d, 1, CH)

41,7 (2CH3); 42,1 (2CH3); 115,0; 116,0; 127,6; 133,7 (4xCH); 133,5; 134,1; 151,4 (2xCq, C+)

HAPyU: 1H-NMR (DMF-d7)

13C-NMR (DMF-d7)

1,90-2,50 (m, 8, 4CH2); 3,60-4,40 (m, 8, 4CH2N); 8,08 (dd, 1, CH); 8,55 (d, 1, CH); 8,90 (d, 1, CH)

24,9+26,5 (4CH2); 52,2+53,8 (4CH2N); 124,6; 128,5; 150,0 (3xCH); 127,5; 143,4 (2xCq); 145,8 (C+)

HOBt: 1H-NMR (DMF-d7)

13C-NMR (DMF-d7)

7,45 (t, 1, CH); 7,55 (t, 1, CH); 7,78 (d, 1, CH); 8,00 (d, 1, CH)

110,2 (CH); 119,8 (CH); 125,0 (CH); 127,9 (CH); 128,9; 143,9 (2xCq)

HONB: 1H-NMR (DMF-d7)

13C-NMR (DMF-d7)

1,63; 3,33 (2m, 6, CH2, 4xCH); 6,08 (s, 2, 2CHolefin); 15 (s, 1, OH)

42,8 (2CH); 44,6 (2CH); 51,3 (CH2); 134,7 (2CHolefin); 173,2 (2CO)

Dicyclohexylharnstoff: TOCSY 1H-NMR (CD2Cl2/DMF-d7)

1,53; 1,64; 1,82 (m, 20, 2x5CH2); 3,48 (2, 2CH); 5,55 (d, 2, 2NH)

Tetramethylharnstoff:

1H-NMR (CDCl3)

13C-NMR (CDCl3)

2,78 (s, 12, 4CH3)

38,5 (4CH3)

Bipiperidinoharnstoff

1H-NMR (CD2Cl2)

13C-NMR (CD2Cl2)

1,40-1,62 (m, 12, 6CH2); 3,11 (m, 8, 4CH2N)

25,2 (2CH2); 26,2 (4CH2); 48,2 (4CH2N); 164,9 (CO)

Bipyrrolidinoharnstoff:

1H-NMR (CDCl3)

13C-NMR (CDCl3)

1,79 (m, 8, 4CH2); 3,34 (m, 8, 4CH2N)

25,5 (4CH2); 47,9 (4CH2N); 161,4 (CO)


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Fri Jun 4 11:04:59 1999