Aus der Klinik für Innere Medizin mit Schwerpunkt Nephrologie Campus Charité Mitte der Medizinischen Fakultät der Charité - Universitätsmedizin Berlin

Dissertation

NO-vermittelte Effekte der Aminosäure L-Arginin auf die
TGF-ß-Überexpression im Modell der
akuten Anti-Thy-1-Glomerulonephritis

Zur Erlangung des akademischen Grades
Doctor medicinae (Dr. med.)

vorgelegt der Medizinischen Fakultät der Charité -
Universitätsmedizin Berlin

von

Ute Daig

aus Berlin

Gutachter:
1. Priv.-Doz. Dr. med. H. Peters
2. Prof. Dr. med. F. Strutz
3. Priv.-Doz. Dr. med. E. Schulze-Lohoff

Datum der Promotion:12.09.2005

Widmung:

für Dr. Erwin Daig, Barbara und Isolde Daig

Zusammenfassung

Hintergrund: L-Arginin spielt eine komplexe Rolle in der renalen Matrixexpansion, eingeschlossen der endogene Stoffwechsel der Aminosäure in Stickoxid (NO), Polyamine, L-Prolin und Agmatin. Bei Ratten mit einer induzierten Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN) ist gezeigt worden, dass die diätetische Gabe von L-Arginin die Überproduktion von transforming growth factor (TGF)-ß sowie die Matrixakkumulation limitieren konnte. Die vorliegende Studie testet die Hypothese, dass die günstigen Effekte auf die Überexpression von TGF-ß in vivo durch die Generierung von NO vermittelt wird.

Methoden: Einen Tag nach Induktion einer Anti-Thy-1-Glomerulonephritis wurden männliche Wistar Ratten, die mit normal proteinhaltigen Futter ernährt worden sind, in die folgenden Gruppen zugeordnet worden: (1) normale Kontrollen; (2) GN; (3) GN-Arg [plus 500 mg L-Arginin/die]; (4) GN-Arg-NAME [plus 500 mg L-Arginin/die und 75 mg/die des NO-Synthase-Inhibitors Nitro-L-Arginin-Methyl-Ester (L-NAME) im Trinkwasser] und (5) GN-Molsi [plus 10 mg/die des NO-Donors Molsidomin]. In Versuchsprotokoll 1 wurde die Behandlung bis Tag 7, in Protokoll 2 bis Tag 12 nach Induktion der Glomerulonephritis durchgeführt. Analysiert wurden die Daten des systolischen Blutdrucks, die histologische glomeruläre Matrixexpansion, die Proteinurie sowie die glomeruläre mRNA- und Protein-Expression des Schlüsselfibrogens TGF-ß, des Matrixproteins Fibronektin und des Protease-Inhibitors Plasminogen-Aktivator-Inhibitor Typ 1(PAI-1).

Ergebnisse: Die Blutdruckwerte zeigten sich normal in unbehandelten Anti-Thy-1-Tieren und nicht signifikant beeinflusst durch eine der Behandlungen. Verglichen mit unbehandelten, nephritischen Ratten, reduzierten die Gabe von L-Arginin sowie von Molsidomin signifikant die glomeruläre TGF-ß Überexpression und auch in ähnlichem Mass in beiden Studienprotokollen. Die günstigen Effekte von L-Arginin wurden durch gleichzeitige Blockade der NOS-Synthese mit L-NAME aufgehoben. Die glomeruläre Matrixakkumulation, Fibronektin und PAI-1 mRNA- und Protein-Expression folgten eng der TGF-ß-Expression. Die Proteinurie wurde durch keine der Behandlungen signifikant beeinflusst.

Schlussfolgerung: Die vorliegende Studie zeigt, dass die antifibrotischen Effekte der Aminosäure L-Arginin in der normotensiven Anti-Thy-1-Glomerulonephritis der Ratte hauptsächlich über die endogene Produktion von NO vermittelt werden. Diese Daten lassen vermuten, dass NO in vivo die TGF-ß-Überexpression auf einem blutdruck-unabhängigen Weg limitiert und dass NO-Donoren sich günstig in der Behandlung von menschlichen fibrotischen Nierenerkrankungen auswirken könnten.

Eigene Schlagworte: L-Arginin, Stickoxid, TGF-ß, Fibrose

Abstract

Background: L-arginine olays a complex role in renal matrix expansion, involving endogenous metabolism into nitric oxide (NO), polyamines, L-prolin and agmatine. Supplementing dietary L-arginine intake has been shown to limit transforming growth factor (TGF)-ß1 overproduction and matrix accumulation in rats with induced Anti-Thy-1 glomerulonephritis (GN). The present study tests the hypothesis that this beneficial effect on in vivo TGF-ß overproduction is mediated via the generation of NO.

Methods: One day after inducion of Anti-Thy-1 GN, male wistar rats fed a normal protein diet were assigned to the following groups: (1) normal controls; (2) GN; (3) GN-Arg [plus 500 mg L-arginine/day]; (4) GN-Arg-NAME [plus 500 mg L-arginine/day and 75 mg/day of the NO synthase inhibitor nitro-L-arginine-methyl ester (L-NAME) in the drinking water] and (5) GN-Molsi [plus 10 mg/day of the NO donor molsidomine]. In protocol 1, treatment lasted until day 7 and in protocol 2 until day 12 after disease induction, respectively. Analysis included systolic blood pressure, proteinuria, a glomerular histologic matrix score and the glomerular mRNA and protein expression of the key fibrogen TGF-ß1, the matrix protein fibronectin and the protease inhibitor plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1).

Results: Blood pressure was normal in untreated Anti-Thy-1 animals and not significantly affected by any of the treatments. Compared to nephritic rats, administration of both L-arginine and molsidomine reduced glomerular TGF-ß1 overexpression significantly and to a similar degree in both protocols, while the beneficial effect of L-arginine was abolished by concomitant NO synthesis inhibition. Glomerular matrix accumulation, fibronectin and PAI-1 mRNA and protein expression cloxely followed the expression of TGF-ß1. Proteinuria was not significantly affected by any treatment.

Conclusion: The present study shows that L-arginine´s antifibrotic action in normothensive Anti-Thy-1 GN is mainly mediated by endogenous production of NO. The data suggest that NO limits in vivo TGF-ß overexpression in a pressure-independent manner and that NO donors may be of benefit in the treatment of human fibrotic renal disease.

Keywords: L-arginine, nitric oxide, TGF-ß, fibrosis

Inhaltsverzeichnis

• 1 Einleitung
  • 1.1  Epidemiologie der chronischen Niereninsuffizienz
  • 1.2  Molekulare Mechanismen bei der chronischen Glomerulonephritis
    • 1.2.1  Nierenfibrose als überschießende Wundheilung
    • 1.2.2 Therapieansätze bei fibrotischen Nierenerkrankungen
    • 1.2.3 Transforming growth factor ß und seine Rolle in der Nierenfibrose
    • 1.2.4 Das L-Arginin/NO-System
      • 1.2.4.1 Die Aminosäure L-Arginin und ihre Stoffwechselwege
      • 1.2.4.2  Stickoxid – ein „ambivalentes“ Molekül
      • 1.2.4.3 Die NO-Synthasen: NOS I (neuronale NO-Synthase), NOS II (induzierbare NO-Synthase) und NOS III (endotheliale NO-Synthase)
  • 1.3  Modell der– Anti-Thy-1-Glomerulonephritis der Ratte
  • 1.4 Fragestellung
• 2  Material und Methoden
  • 2.1  Materialien
  • 2.2 Tierversuch
    • 2.2.1  Tiere und Tierhaltung
    • 2.2.2 Die Anti-Thy-1-Glomerulonephritis – Herstellung des Antikörpers OX-7
    • 2.2.3 Aufreinigung des Kulturüberstandes
    • 2.2.4 Induktion der Glomerulonephritis
  • 2.3 Futter
    • 2.3.1  Wirkstoffe
      • 2.3.1.1 L-Arginin
      • 2.3.1.2 Molsidomin
      • 2.3.1.3 N-ω-Nitro-L-Arginin-Methyl-Ester (L-NAME)
    • 2.3.2 Wirkstoffzubereitung
  • 2.4 Studienprotokolle
    • 2.4.1  Protokoll 1 – Effekte der Behandlung mit L-Arginin, Molsidomin und L-Arginin + L-NAME sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis
    • 2.4.2 Protokoll 2 – Effekte der Behandlung mit L-Arginin, Molsidomin und L-Arginin + L-NAME zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis
  • 2.5 Versuchsparameter
    • 2.5.1  Messung des systolischen Blutdrucks
    • 2.5.2 Urinsammlung
    • 2.5.3  Entnahme der Nieren
    • 2.5.4 Aufarbeitung der Nieren, Isolation der Glomeruli für die Zellkultur
    • 2.5.5 Zellkultur
  • 2.6 Messung der Krankheitsparameter
    • 2.6.1  Histologie
      • 2.6.1.1 Einbettung und Anfertigung der histologischen Schnitte
      • 2.6.1.2 Histologische Färbungen
        • 2.6.1.2.1 PAS-Färbung
        • 2.6.1.2.2 Immunhistochemische Färbung des Zytokins TGF-ß1
      • 2.6.1.3 Histologische Auswertung
    • 2.6.2 ELISA – Enzym Linked Immuno Sorbent Assay
      • 2.6.2.1  Transforming growth factor-ß ELISA
      • 2.6.2.2 Fibronektin ELISA
      • 2.6.2.3 Plasminogen-Aktivator-Inhibitor-1 ELISA
    • 2.6.3 Proteinurie
    • 2.6.4 Glomeruläre messenger-RNA-Expression von TGF-ß1, Fibronektin und PAI-1
      • 2.6.4.1 Isolation der glomerulären RNA
      • 2.6.4.2 Bestimmung des RNA-Gehaltes und der Qualität
        • 2.6.4.2.1 Gelelektrophorese
    • 2.6.5 Konzentrationsmessung der RNA mittels Spektrometer
    • 2.6.6  RT-PCR
      • 2.6.6.1  Reverse Transkriptase-Reaktionen
      • 2.6.6.2 PCR
  • 2.7 Nitrat/Nitrit-Messung (Griess-Assay)
  • 2.8 Effekte des NO auf die glomeruläre TGF-ß-Produktion in vitro
  • 2.9  Statistische Auswertung
• 3  Ergebnisse
  • 3.1  Protokoll 1 Effekte der Behandlung mit L-Arginin, Molsidomin und L-Arginin + L-NAME sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis
    • 3.1.1  Gewichtsverhalten
    • 3.1.2 Aufgenommene Dosen von L-Arginin, Molsidomin und L-NAME
      • 3.1.2.1 L-Arginin
      • 3.1.2.2  L-NAME
      • 3.1.2.3 Molsidomin
    • 3.1.3  Systolischer Blutdruck
    • 3.1.4 Glomerulärer Matrixgehalt
    • 3.1.5 Glomeruläre TGF-ß-Produktion
    • 3.1.6  Glomeruläre Fibronektin-Produktion
    • 3.1.7  Glomeruläre PAI-1-Produktion
    • 3.1.8  Proteinurie
    • 3.1.9 mRNA-Expression von TGF-ß1, Fibronektin und PAI-1
      • 3.1.9.1 Glomeruläre mRNA-Expression von TGF-ß1
      • 3.1.9.2  Glomeruläre mRNA-Expression von Fibronektin
      • 3.1.9.3  Glomeruläre mRNA-Expression von PAI-1
    • 3.1.10  NO2‾/NO3‾ im Plasma
    • 3.1.11 NO2‾/NO3‾ im Urin
    • 3.1.12  Effekte von NO auf die glomeruläre TGF-ß-Produktion in vitro
      • 3.1.12.1  Effekt von NO auf die glomeruläre TGF-ß-Produktion gesunder Kontrolltiere in vitro
      • 3.1.12.2  Effekt von NO auf die glomeruläre TGF-ß-Produktion nephritischer Tiere sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis in vitro
    • 3.1.13  Immunhistochemische Färbung von TGF-ß1-Protein sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis
  • 3.2  Protokoll 2 Effekte der Behandlung mit L-Arginin, Molsidomin und L-Arginin + L-NAME zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis
    • 3.2.1  Gewichtsverhalten
    • 3.2.2 Aufgenommene Dosen von L-Arginin, Molsidomin und L-NAME
      • 3.2.2.1 L-Arginin
      • 3.2.2.2  L-NAME
      • 3.2.2.3 Molsidomin
    • 3.2.3  Glomerulärer Matrixgehalt
    • 3.2.4  Glomeruläre TGF-ß-Produktion
    • 3.2.5  Glomeruläre Fibronektin- Produktion
    • 3.2.6  Glomeruläre PAI-1-Produktion
    • 3.2.7  Proteinurie
      • 3.2.7.1  NO2‾/NO3‾ im Plasma
      • 3.2.7.2  NO2‾/NO3‾ im Urin
  • 3.3 Zusammenfassung der Ergebnisse
• 4  Diskussion
  • 4.1  Methodenkritik
    • 4.1.1  Tiermodelle
    • 4.1.2  TGF-ß-Expression als zentraler Parameter für die Fibroseaktivität
    • 4.1.3 Weitere Parameter zur Messung der Fibroseaktivität
  • 4.2  Wirkung der L-Arginin-Gabe, der NO-Donation und der Blockade der NO-Synthese auf den Blutdruck
  • 4.3  Wirkung der pharmakologischen Intervention in den L-Arginin/NO-Stoffwechsel auf die Expression der Fibrosemarker TGF-ß, Fibronektin und PAI-1 sowie auf die Matrixexpansion
    • 4.3.1  Effekte der diätetischen L-Arginin-Zufuhr
    • 4.3.2 Effekte der diätetischen L-Arginin-Zufuhr unter gleichzeitiger Hemmung der NO-Synthase mit L-NAME
    • 4.3.3 Effekte der NO-Donation mit Molsidomin
  • 4.4 Effekte auf die NOx-Konzentrationen in Blutplasma und Urin
  • 4.5 TGF-ß und NO
  • 4.6 Proteinurie
  • 4.7 L-Arginin – eine Aminosäure mit gegensätzlichen Wirkungen
• 5  Zusammenfassung
• 6. Literaturverzeichnis
• 7. Erklärung an Eides Statt
• 8. Publikationsverzeichnis
• Danksagung

Tabellen

• Tab. 1: Zusammensetzung der Zuchtdiät 1311 für Ratten der Firma Altromin, Lage
• Tab. 2: täglich verabreichte Dosis der Wirkstoffe L-Arginin, Molsdomin und L-NAME in mg
• Tab. 3: Protokoll 1/Protokoll 2; Aufteilung der Tiere in die verschieden Therapiegruppen
• Tab. 4: PCR-Protokolle für GAPDH, TGF-ß, Fibronektin und PAI-1: Sense/Antisense-Sequenzen, Temperaturprofile und Zykluslängen
• Tab. 5: Mittleres Körpergewicht in g der Gruppen in Versuchsprotokoll 1; In der ANOVA-Prozedur zeigten sich keine signifikanten Unterschiede bei den Gewichten der einzelnen Gruppen. P=NS für alle Gruppen
• Tab. 6: Mittleres Körpergewicht in g der Gruppen in Versuchsprotokoll 2; In der ANOVA-Prozedur zeigten sich keine signifikanten Unterschiede bei den Gewichten der einzelnen Gruppen. P=NS für alle Gruppen (ANOVA)

Bilder

• Abb. 1: Formel für die Berechnung der Proteinurie in mg/24h
• Abb. 2: Formel für die Berechnung des RNA-Konzentration in µg/ml
• Abb. 3: Protokoll 1: Dosis der diätetischen L-Arginin-Zufuhr in mg/die; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name  (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. ***P< 0,001 vs. Kontrolle, GN und GN-Molsi
• Abb. 4: Protokoll 1: Effekte der Behandlung auf den systolischen Blutdruck; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name  (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion.
• Abb. 5: Protokoll 1: Effekte auf den glomerulären Matrixgehalt; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. * P < 0.05 vs. GN, ** P < 0,01 vs. GN
• Abb. 6: Protokoll 1: Effekte auf die glomeruläre TGF-ß-Produktion; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. *** P < 0.001 vs. GN
• Abb. 7: Protokoll 1: Effekte auf die glomeruläre Fibronektin-Produktion; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name  (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. *** P < 0.001 vs. GN
• Abb. 8: Protokoll 1: Effekte auf die glomeruläre PAI-1-Produktion; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. * P < 0.05 vs. GN
• Abb. 9: Protokoll 1: Effekte auf die Proteinurie; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. P=NS GN vs. GN-Arg, GN-Arg-NAME, GN-Molsi (ANOVA)
• Abb. 10: Protokoll 1: Effekte auf die mRNA-Expression von TGF-ß1 relativ zur mRNA-Expression von housekeeping gene GAPDH; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. ***P < 0,001 vs. GN
• Abb. 11: Protokoll 1: Effekte auf die mRNA-Expression von Fibronektin relativ zur mRNA-Expression von Housekeeping gene GAPDH; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. ***P < 0,001 vs. GN
• Abb. 12: Protokoll 1: Effekte auf die mRNA-Expression von PAI-1 relativ zur mRNA-Expression von Housekeeping gene GAPDH; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. ***P < 0,001 vs. GN
• Abb. 13: Protokoll 1: Effekte auf die NOx-Spiegel im Plasma; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN) Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. *P < 0,05 vs. GN
• Abb. 14: Protokoll 1: Effekte auf die NOx-Spiegel im Urin; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. **P < 0,01 vs. GN
• Abb. 15: Protokoll 1: Effekte der NO-Donation mittels DETA NONOate in ansteigenden Konzentrationen auf die TGF-ß-Produktion in vitro auf kultivierte Glomeruli gesunder Tiere. Die Kontrolle erhielt kein DETA NONOate. ***P < 0,001 vs. GN
• Abb. 16: Protokoll 1: Effekte der NO-Donation mittels DETA NONOate in ansteigenden Konzentrationen auf die TGF-ß-Produktion in vitro auf kultivierte Glomeruli nephritischer Tiere sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephrits. Die Kontrolle erhielt kein DETA NONOate. *P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001 vs. GN
• Abb. 17: Charakteristische immunhistochemische Färbung des renalen TGF-ß1 Proteins sieben Tage nach Induktion der Glomerulonephritis. (A) zeigt die Färbung bei normalen, gesunden Kontrolltieren (Kontrolle). Bild (B) zeigt die TGF-ß1-Färbung bei unbehandelten nephritischen Tieren (GN), (C) die Gabe von L-Arginin (GN-Arg), (D) die kombinierte Behandlung L-Arginin und L-NAME (GN-Arg-NAME) und (E) die NO-Donation mit Molsidomin (GN-Molsi).
• Abb. 18: Protokoll 2: Dosis der diätetischen L-Arginin-Zufuhr in mg/die; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name  (-Arg-NAME) zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion.L-Argininaufnahme der Gruppen in Versuchsprotokoll 2; ***P< 0,001 vs. Kontrolle, GN und GN-Molsi
• Abb. 19: Protokoll 2: Effekte auf den glomerulären Matrixgehalt; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. * P < 0.05 vs. GN, ** P < 0,01 vs. GN
• Abb. 20: Protokoll 2: Effekte auf die glomeruläre TGF-ß-Produktion; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name  (-Arg-NAME) zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. *** P < 0.001 vs. GN
• Abb. 21: Protokoll 2: Effekte auf die glomeruläre Fibronektin-Produktion; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name  (-Arg-NAME) zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. ** P < 0.01 vs. GN
• Abb. 22: Protokoll 2: Effekte auf die glomeruläre PAI-1-Produktion; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. * P < 0.05 vs. GN
• Abb. 23: Protokoll 2: Effekte auf die Proteinurie; Behandlung mit L-Arginin  (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. P=NS GN-Molsi vs. GN, GN-Arg, GN-Arg-NAME (ANOVA)
• Abb. 24: Protokoll 2: Effekte auf die NOx-Spiegel im Plasma; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN) Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. **P < 0,01 vs. GN
• Abb. 25: Protokoll 2: Effekte auf die NOx-Spiegel im Urin; Behandlung mit L-Arginin (-Arg), Molsidomin (-Molsi) und L-Arginin + L-Name (-Arg-NAME) zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis (GN). Die Kontrolle erhielt eine PBS-Injektion. Die Behandlung begann 24 Stunden nach der Krankheitsinduktion. **P < 0,01 vs. GN