| Jessica Drews: Konzentration Lektin-spezifischer Speichelglykane im Verlauf einer experimentellen Gingivitis |
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Materialien zur klinischen Untersuchung
- Befundungssoftware Prolax® (prophy-Ware-GmbH, Leer)
- zahnärztliche Behandlungseinheit Siro 1 s (Siemens AG, Stuttgart)
- planer oberflächenverspiegelter Mundspiegel (Größe 5, Aesculap, Tutlingen)
- zahnärztliche Pinzette (Aesculap, Tutlingen)
- Parodontalsonde PCP 10 (Hu-Friedy Europe, B.Quétin GmbH, Leimen)
- gerade zahnärztliche Sonde (Aesculap, Tutlingen)
- Apparatur zur Speichelgewinnung (Jancke, 2002)
- Sterilium (Bode Chemie, Hamburg)
- Speisewürze aus Zitronensaft 2%ig (Sizilia Citrussäfte GmbH & Co Deutschland, Berlin))
- Reagenzröhrchen (Sarstedt, Nümbrecht)
- Zentrifugenröhrchen (Sarstedt, Nümbrecht)
- Trockeneis
- Satorius Analysewaage (Satorius GmbH, Göttingen)
- Eppendorf Zentrifuge 5415c (Eppendorf, Berlin)
- Eppendorf Pipette (Eppendorf, Berlin)
Computer und zugehörige Software
- Pentium(R) 4 CPU 2.00GHz 256 MB RAM
- Windows XP
- Word 2000
- Photo Draw 2000
- SPSS für Windows 10.0
Labormaterialien
- 96-well Mikrotiterplatte (Nunc GmbH Deutschland, Wiesbaden)
- Eppendorf Pipette (Eppendorf, Berlin)
- Multikanalpipette (Socorex, Swiss)
- Pipettenspitzen (Sarstedt, Nümbrecht)
- Eppendorf Zentrifuge 5410 (Eppendorf, Berlin)
- Minishaker IKA MS 2 (IKA Labortechnik, Staufen i.Br.)
- Kühlschrank (4°C) (Liebherr, Biberach an der Riss)
- Gefrierschrank (-20°C) (Liebherr, Biberach an der Riss)
- Gefrierschrank (-80°C) (Liebherr, Biberach an der Riss)
- „Greiner“-Röhrchen mit Kappen und Kästen („Rack System“) (Greiner, Nürtlingen)
- Satorius Analysewaage (Satorius GmbH, Göttingen)
- Schüttler IKA MTS 4 (IKA Labortechnik, Staufen i. Br.)
- ELISA Processor 2 (Behring; Schwalbach)
- Spektralphotometer Dynatech MR 7000 (Dynatech, Denkendorf)
Puffer
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Proben-Verdünnungspuffer:
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1,2 g KH2PO4
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+ 8,22 g Na2HPO4/l (= PBS)
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+ 150 mM NaCl (= 0,766 g/l)
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+ 1 mM EDTA (= 372,2 mg/l)
(Sigma Biochemica, Deisenhofen)
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Lektinassay-Puffer:
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1,2 g KH2SO4
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+ 8,22 g Na2HPO4 /l (= PBS)
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+ 150 mM NaCl/l
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+ 0,05 mM CaCl2/l
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+ 0,1mM MnCl2/l
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+ 2,0 mM MgCl2/l
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+ 0,025 mM ZnCl2/l
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+ 0,2 % TWEEN
(Sigma Biochemica, Deisenhofen)
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Wasch-Puffer:
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1,2 g KH2SO4
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+ 8,22 g Na2HPO4 /l (= PBS)
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+ 0,05 % TWEEN
(Sigma Biochemica, Deisenhofen)
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Phosphat-Puffer (PBS) für Beschichtungen:
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1,2 g KH2SO4
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+ 8,22 g Na2HPO4 /l
(= PBS), pH = 7,6
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Lektine
Biotinylierte pflanzliche Lektine (Sigma Biochemica, Deisenhofen & Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim)
Die jeweilige Bindungsspezifität, die Verdünnung, die zur Beschichtung verwendeten Glykokonjugate und Standards sind der Tabelle 7 zu entnehmen.
Beschichtungen, Standard und Kontrolle
Beschichtungen:
- BSA-Galaktose-1,3-N-Acetyl-Galaktosamin (Janssen Biochemica, Beerse, Belgien)
- Alle übrigen Beschichtungen (siehe Tabelle 7) wurden über die Firma „Sigma Biochemica, Deisenhofen“ bezogen.
Standard:
- N-Acetyl-saures-Glykoprotein (Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim)
- Muzinpräparation
- Alle übrigen für den Standard verwendeten Zucker (siehe Tabelle 7) wurden über die FIRMA „Sigma Biochemica, Deisenhofen“ bezogen.
Kontrolle:
- Die bei einem 30 ml Ansatz verwendeten Zucker der Kontrolle sind in Tabelle 8 aufgelistet.
Färbung
Tetramethylbenzidin (TMB) – Färbepuffer:
1% TMB-Lösung in Gallati-Puffer:
- TMB-Lösung: 240 mg TMB (Fluka-Chemie, Buchs, Schweiz)
+ 5 ml DMSO (= Dimethyl-Sulfon-Oxid)
+ 5 ml Ethanol
- Gallati-Puffer: 8,4 g Zitronensäure-Monohydrat auf 160 ml Aqua dest. mit 4N KOH auf pH-Wert 3,95 einstellen und auf 200 ml mit Aqua dest auffüllen. Zur Fertigstellung 68 µl 30%iges H2O2 dazugeben. (-in dunkler Flasche ca. 3 Wochen im Kühlschrank lagerbar-)
- Streptavidin gekoppelt mit Peroxidase als sekundäres Konjugat (Calbiochem Corporation, La Jolla, USA)
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13.04.2006 |