MATERIAL

2.1 Reagenzien und Lösungen

2.1.1 Zellkultur

↓20

Airway Epithelial Cell Growth Medium

PromoCell

Dispase ΙΙ 2,4U/ml

Roche Diagnostics

Essigsäure 1% (v/v) in PBS

J.T. Baker

Fetal-Bovine-Serum

Biochrom AG

Hanks Salzlösung mit Phenolrot

Biochrom AG

Hyaluronidase 1000U/ml

Sigma-Aldrich

Kollagen A 1mg/ml

Biochrom AG

Kollagenase CLS II 10.000U/ml

Biochrom AG

Kollagenase P 30U/ml

Boeringer Mannheim

Penicillin/Streptomycin 10000U/ml/10000μg/ml

Biochrom AG

Phosphat-Buffered-Saline ohne Ca2+/Mg2+

Biochrom AG

Percoll seperating solution 1,077g/ml

Biochrom AG

RPMI 1640 Medium (mit Hepes; mit L-Glutamin)

Biochrom AG

Tryphanblau 0,4%

Sigma

Trypsin 0,5% / EDTA 0,2%

Biochrom AG

2.1.2 Molekularbiologie

↓21

Brom-Chlor-Propan

Sigma

dATP, dGTP, dCTP, dTTP 100mM

Invitrogen

DEPC- H2O

Sigma

Diethylpyrocarbonat

Sigma

DTT 0,1M

Invitrogen

Ethanol 70% in DEPC-H2O

J.T. Baker

5x First Strand Buffer

Invitrogen

Isopropanol

J.T. Baker

Oligo (dt)12-18 Primer 0,5µg/µl

Invitrogen

Rnasin RNAse Inhibitor 40U

Promega

SuperScript Rnase H- RT 200U/µl

Invitrogen

Tri Reagent LS

Sigma

Tris-EDTA Puffer

Sigma

2.1.3 Histologie, Immunhistochemie, Durchflußzytometrie und Mikroskopie

Aceton

J.T. Baker

Alcianblau 8GX

Roth

3-Amino-9-Ethyl-Carbazol (AEC)

Dako

Antikörper-Verdünnungs-Puffer

Dako

Aquatex

Merck

Bisbenzimide 10μg/ml

Sigma

DAPI (4',6-Diamidino-2-phenylindol)

Sigma

Eisenhämatoxylin nach Weigert

Merck

Eosin

Merck

Essigsäure 99%

J.T. Baker

Ethanol 100%

J.T. Baker

EnVision™+System, Peroxidase (AEC, Mouse)

DAKO

Formaldehyd-Lösung 4% gepuffert

Herbeta-Arzneimittel

Glutaraldehyd (25% v/v in PBS)

Roth

Hämatoxylin nach Mayer

Sigma

Horse-Radish-Peroxidase (HRP)

DAKO

Kanadabalsam

Merck

Kernechtrot-Aluminiumsulfat

Merck

Lichtgrün

Merck

Methanol

J.T. Baker

Monoklonaler Antikörper 34βE12 (Mouse, Anti-Human)

DAKO

Monoklonaler Antikörper CD3-Biotin (Mouse, Anti-Human)

DRFZ

Monoklonaler Antikörper CD49f (Mouse, Anti-Human)

ACRIS GmbH

Monoklonaler Antikörper CD49f–PE (Mouse, Anti-Human)

ACRIS GmbH

Monoklonaler Antikörper CD104 (Mouse, Anti-Human)

ACRIS GmbH

Monoklonaler Antikörper CD104–PE (Mouse, Anti-Human)

ACRIS GmbH

Monoklonaler Antikörper CD44v6 (Mouse, Anti-Human)

Bender Medsystems

Orange G

Merck

Peroxidase-Inhibitor

DAKO

Phosphormolibdänsäure

Merck

Ponceau de Xylidine

Merck

PBS/BSA 0,5%

DRFZ

Proteinblock, serumfrei mit Casein 0,25%

DAKO

Säurefuchsin

Merck

Streptavidin-PE

DRFZ

Xylol

J.T. Backer

2.2 Geräte

2.2.1 Zellkultur

Cellagen Discs CD-6

ICN Biomedicals

CO2-Begasungsbrutschrank Hera Cell

Heraeus

Gefrierschrank –20°C

Liebherr

Gefrierschrank –80°C

Gesell. für Labortechnik

Kanülen (20G) steril

Braun

Magnetrührer, Variomag

Biosystem

Mikroskop CK 40 mit Digitalkamera C-2020Z

Olympus

Neubauer Hämozytometer (2,5x10-3 mm2)

Paul Marienfeld

Petrischalen (d=8,5cm)

Nunc Brand Products

Pipettenspitzen steril

Eppendorf

Pipettierhilfe Akku-Jet

Brand

Röhrchen 15ml/50ml

Becton Dickinson

Serologische Pipetten

Becton Dickinson

Skalpelle steril

Bard Parker™

Spinner-Flaschen 50ml

Wheaton

Spritzen steril

Braun

Sicherheitswerkbank Hera Safe Klasse 2 Typ H

Heraeus

Sterilfilter 0,2µm

Schleicher & Schuell

Wasserbad Typ 1003

Gesell. für Labortechnik

6-Well Kulturplatten steril

Falcon

8-Well Chamber Slides (1,25cm2/Kammer)

Lab-Teck

Zellkulturflaschen T25/T75/T175

Nunc Brand Products

Zell-Schaber

Corning Inc.

Zellsiebe 100µm

Becton Dickinson

Zentrifuge 5804 mit Ausschwingrotor

Eppendorf

Zentrifugenröhrchen (15ml, 50ml), steril

Nunc Brand Products

2.2.2 Molekularbiologie

↓22

Photometer GeneQuant pro

Biochrom AG

Plexi Cooler

Biozym

Pipetten

Rainin

Reaktions Caps

Applied Biosystems

Reaktionsgefäße 1,5ml und 2ml

Eppendorf

Reaktionsgefäße 0,2ml

Applied Biosystems

Sero Cooler Easy Freezer

Biozym

Ständer

Eppendorff

Thermocycler PTC 100

MJ Research inc.

Thermomixer 5436

Eppendorf

Vortex-Genie

Merck

Zentrifuge Biofuge Fresco

Heraeus

2.2.3 Histologie, Immunhistochemie, Durchflußzytometrie und Mikroskopie

Critical Point Dryer

Balzers Union

DAKO-Pen

DAKO

Deckgläschen

Menzel Gläser

Faltenfilter

Schleicher & Schuell

Fluoreszenzdurchflußzytometer FACSCalibur

BD Bioscience

Zellsortiermaschine (Cell Sorter) MoFlo

Dako Cytomation Inc.

Kryostat CM1900

Leica

Rasterelektronemikroskop DSM 950

Zeiss

Mikroskop CX41 mit Digitalkamera C-2020Z

Olympus

Objektträger

Menzel Gläser

Silicagel-Kugeln

Roth

Sputtergerät SCD 040

Balzers Union

Tissue Tek Einbettmedium

Sakura Fineteck

Tissue Teck Einbettschalen

Miles

Wärmeschrank Function Line 37°C

Heraeus

2.3 Nährmedien für die Zellkultur

AECGM; serumfrei

↓23

Adrenalin 0,5μg/ml

Insulin 5μg/ml

Bovine Pituitary Extract 0,4%

Transferrin 10μg/ml

Epidermal Growth Factor 0,5ng/ml

Triiodthyronin 6,7ng/ml

Hydrokortison 0,5μg/ml

Vitamin A 0,1ng/ml

P/S 1%

 

RPMI 1640 Kulturmedium

P/S 1%

NaCl 5,5g/l

FBS 10%

NaHCO3 2g/l

HEPES 25mM

Phenolrot 5mg/l

N-Acetyl-L-Alanyl-L-Glutamin 0,532g/l

 

↓24

Basismedium für die Chondrozytendifferenzierung

DMEM (high glucose)

HEPES 25mM

P/S 1%

 

Differenzierungsmedium für Chondrozyten

↓25

Basismedium

Dexamethason 0,1µM

ITS 1%

NaHCO3 2g/l

Natriumpyruvat 1mM

Ascorbat 0,17mM

TGF-ß1 10ng/ml

L-Prolin 0,35mM


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23.11.2005