Das Ziel dieser Arbeit war die Klärung der Funktion eines hochmolekularen, Proteasomen-assoziierten Proteins, das in affinitätschromatographisch isolierten Proteasomenpräparationen detektiert worden war. Daraus ergaben sich folgende Zwischenziele:

• Identifizierung des hochmolekularen, Proteasomen-assoziierten Proteins durch Peptide-Mass-Fingerprinting,

• Herstellung und phänotypische Untersuchung einer Deletionsmutante,

• Charakterisierung des proteasomalen Komplexes oder der proteasomalen Komplexe, an den oder die das hochmolekulare Protein assoziiert ist.

Durch die Identifizierung des hochmolekularen, Proteasomen-assoziierten Proteins als Blm3 ergaben sich durch bereits veröffentlichte bzw. im Laufe der Arbeit publizierte Daten neue Fragestellungen:

Aufgrund der Bleomycin-Hypersensitivität der blm3-1-Punktmutante und der blm3-Deletionsmutante wurde eine Beteiligung des Proteins Blm3 an der DNA-Reparatur vermutet (Moore, 1991; Evans-Febres et al., 2001; vgl. Kapitel 2.5). Daher sollte die folgende Frage untersucht werden:

• Ist die Bleomycin-Hypersensitivität der ∆blm3-Deletionsmutante reproduzierbar? Gibt es Hinweise auf eine Beteiligung des Proteins Blm3 an der DNA-Reparatur?
  Durch die proteasomale Degradation von Stm1 wird die Apoptose in S. cerevisiae reguliert, und die zugehörige ∆stm1-Deletionsmutante verhält sich Bleomycin-hypersensitiv (Ligr et al., 2001; vgl. Kapitel 2.4.4). Daher sollte folgende Frage geklärt werden:

• Gibt es Hinweise auf eine Beteiligung von Blm3 an der Apoptose?
  Das zu Blm3 homologe Protein PA200 fungiert in vitro als Proteasomen-Aktivator (Ustrell et al., 2002; vgl. Kapitel 2.5). Daraus ergaben sich die weiteren Fragen:

• Ist Blm3 in vitro ein Proteasomen-aktivierendes Protein?

• Übt Blm3 in vivo einen Einfluss auf die Aktivität des Proteasoms aus? Zur Klärung dieser Frage sollte exemplarisch die Degradation der cytosolischen FBPase sowie die ER-assoziierte Degradation von CPY* und CTG* analysiert werden.