Inhaltsverzeichnis

• 1. Einleitung

• 2. Material und Methoden

  • 2.1. Patientengut und Biopsieentnahme

  • 2.2. Strategie des Arbeitablaufes

  • 2.3. Probenaufbereitung für PCR

    • 2.3.1. RNA-Extraktion

    • 2.3.2. DNAse Verdau

    • 2.3.3. Reverse Transkription

  • 2.4. Primerkonstruktion

  • 2.5. Polymerase Ketten Reaktion (PCR)

  • 2.6. Probenaufarbeitung für Western Blot

    • 2.6.1. Proteinextraktion

    • 2.6.2. Proteinmessung

  • 2.7. Western Blot

    • 2.7.1. Diskontinuierliche SDS-Gelelektrophorese der Probenproteine

    • 2.7.2. Comassiefärbung

    • 2.7.3. Calcineurin B AK

    • 2.7.4. Western Blot Verfahren

    • 2.7.5. Anfärbung der Proteine als Kontrollreaktion

    • 2.7.6. Nachweisreaktion Hybridisierung der AK

    • 2.7.7. Visualisierung der Nachweisreaktion

    • 2.7.8. Detektion

  • 2.8. Quantitative Bestimmung des Anteils an interstitiellem Gewebe (Fibrose, Narben) im Myokard

  • 2.9. Validierung der Methoden

    • 2.9.1. RNA-Ausbeute vor und nach Dnase-Verdau

    • 2.9.2. Etablierung quantitativer PCR

      • 2.9.2.1. Optimale Spezifität durch Hot-Start-Technik

      • 2.9.2.2. Optimale Primerkonstruktion

      • 2.9.2.3. Primeroptimierung für Real-Time-PCR

      • 2.9.2.4. Validierung der optimalen PCR Zykluslänge

    • 2.9.3. Validierung der Quantifizierung anhand einer Eichgeraden

      • 2.9.3.1. Erstellen einer Eichgerade

      • 2.9.3.2. Auswertung mit Hilfe der Standardgeradengleichung

      • 2.9.3.3. Kalibrator und externe Standardisierung

    • 2.9.4. Proteinausbeute

    • 2.9.5. Etablierung quantitatives Western Blot-Verfahren

      • 2.9.5.1. Proteineinsatz und Proteinqualität

      • 2.9.5.2. Optimale Trennbedingungen bei SDS-PAGE

      • 2.9.5.3. Optimale Transferbedingungen des Western Blot

      • 2.9.5.4. AK-Optimierung

      • 2.9.5.5. Versuchskonsistenz und externe Standardisierung

    • 2.9.6. Etablierung der quantitativen Fibrosemessung

  • 2.10. Darstellung der Ergebnisse und Statistik

    • 2.10.1. Darstellung der Ergebnisse

    • 2.10.2. Statistik

• 3. Ergebnisse

  • 3.1. Untersuchung der krankheitsspezifischen Genregulation

    • 3.1.1. Regulation von CnB, ANP und BNP mRNA in hypertrophierten Herzen mit DCM, AS und KHK

    • 3.1.2. Korrelation von ANP, BNP und CnB mRNA in hypertrophierten Herzen

  • 3.2. Untersuchung des krankheitsspezifischen CnB Proteingehalts

    • 3.2.1. CnB Proteingehalt in hypertrophierten Herzen mit AS, DCM und KHK

  • 3.3. Beziehungen zwischen CnB mRNA- und Proteingehalt

  • 3.4. Krankheitsspezifischer Fibrosegehalt

    • 3.4.1. Charakterisierung der Kontrollgruppe

    • 3.4.2. Fibrosegehalt bei DCM

    • 3.4.3. Fibrosegehalt bei KHK

  • 3.5. Beziehung zwischen Fibrosegehalt und Gen-bzw. Proteinregulation

• 4. Diskussion

  • 4.1. Wichtigste Ergebnisse

  • 4.2. 

  • 4.3. CnB spezifische Genexpressionsregulation und Proteingehalt in hypertrophierten Herzen mit DCM

  • 4.4. CnB spezifische Genexpressionsregulation und Proteingehalt in hypertrophierten Herzen mit ICM nach koronarer Herzerkrankung

  • 4.5. CnB spezifische Genexpressionsregulation und Proteingehalt in hypertrophierten Herzen mit AS

  • 4.6. Remodeling-Hypertrophie und veränderte extrazelluläre Matrix

  • 4.7.  Fibrosegehalt der Kontroll-und Patientengruppen

  • 4.8. 

  • 4.9. Zusammenfassung

• 5. Anhang

• 6. Literatur

• Danksagung

• Tab. :Tabelle mit klinischen und hämodynamischen Daten der Patienten

• Tab. : Primersequenzen, Amplifikatlängen, Accessionnumber der Gene

• Tab. 3: Daten der RNA-Ausbeute vor und nach Dnase-Verdau

• Tab. 4:Daten der Protein-Ausbeute

• Tab. 5: ANP mRNA in Kontroll-und Krankheitsgruppen

• Tab. 6: BNP mRNA in Kontroll-und Krankheitsgruppen

• Tab. 7: CnB mRNA in Kontroll-und Krankheitsgruppen

• Tab.8: Korrelationskoeffizienten der ANP und BNP mRNA in Kontroll- und Krankheitsgruppen

• Tab. 9: CnB Proteingehalt der untersuchten Krankheitsgruppen mit jeweiligem Vergleichswert

• Tab. 10: Korrelationskoeffizienzen der CnB mRNA- und Proteinergebnissen

• Abb. : Standardgerade einer PCR-Quantifizierung

• Abb. : PCR-Amplot

• Abb. : Anstieg von CnB mRNA in Herzen mit DCM

• Abb. : CnB mRNA-Gehalt in Herzen mit AS

• Abb. : CnB mRNA-Gehalt in Herzen mit KHK

• Abb. , 6b: Korrelation von ANP und BNP Expression bei DCM

• Abb. : Korrelation der ANP und BNP Expression bei AS

• Abb. : ANP und BNP Expression bei KHK; keine signifikante Korrelation

• Abb. : CnB und BNP Expression bei DCM; keine signifikante Korrelation

• Abb. : Korrelation von ANP und BNP mRNA der Kontrollherzen

• Abb. : CnB Proteingehalt der Herzen mit DCM

• Abb. : CnB Proteingehalt der Herzen mit AS

• Abb. : CnB Proteingehalt der Herzen mit KHK

• Abb. : Gesteigerter prozentualer Gesamtfibrosegehalt der DCM und KHK-Patientengruppen

• Abb. : Fehlende Korrelation BNP mRNA versus Fib.%, r = 0,315 n.s.

• Abb. : Fehlende Korrelation ANP mRNA versus Fib.%, r = 0,249 n.s.

• Abb. : Hypertrophieinduzierte Signalkaskaden