Aus der Medizinischen Klinik mit Schwerpunkt
Hämatologie, Onkologie und Tumorimmunologie,
Charité Universitätsmedizin Berlin,
Campus Buch,
der Humboldt-Universität zu Berlin

Dissertation

Mutationsanalysen von K-ras und p53
bei Patienten mit Plattenepithelkarzinom des Ösophagus

Zur Erlangung des akademischen Grades
Doctor medicinae (Dr. med.)

vorgelegt der Medizinischen Fakultät Charité
der Humboldt-Universität zu Berlin

von
Lisa Holper
aus München

Gutachter:
1. Prof. Dr. med. P. T. Daniel
2. Prof. Dr. R. Greil
3. Priv.-Doz. Dr. med. C. Belka

Datum der Promotion: 10.02.2006

Widmung:

Meinen Eltern

Inhaltsverzeichnis

• 1.  Zusammenfassung
• 2.  Einleitung
  • 2.1.  Das Plattenepithelkarzinom des Ösophagus
    • 2.1.1.  Modelle zur Tumorgenese ösophagealer Plattenepithelkarzinome
    • 2.1.2.  Ursachen und Risikofaktoren
    • 2.1.3.  Inzidenz
    • 2.1.4.  Mortalitätsraten
    • 2.1.5.  Symptomatik und klinisches Bild
    • 2.1.6.  Diagnostische und prognostische Ansätze
    • 2.1.7.  Therapeutische Ansätze
  • 2.2. Molekularbiologische Grundlagen
    • 2.2.1.  Apoptose und Nekrose
    • 2.2.2.  Apoptosesignalwege
    • 2.2.3.  Das Onkogen K-ras
    • 2.2.4.  Zellzyklus und Tumorsuppressorgen p53
  • 2.3. Genetische Veränderungen in Tumoren
    • 2.3.1.  Allgemeine Kategorien genetischer Veränderungen in Tumoren
    • 2.3.2.  Genetische Veränderungen von K-ras
    • 2.3.3.  Genetische Veränderungen des p53 Genes
    • 2.3.4.  Genetische Veränderungen in Ösophaguskarzinomen
• 3.  Patienten, Material und Methoden
  • 3.1.  Patienten-Kollektiv der Plattenepithelkarzinome des Ösophagus
  • 3.2.  Allgemeine Darstellung der, zur Mutationsanalyse verwendeten Methoden
    • 3.2.1.  Polymerase-Ketten-Reaktion (Polymerase-Chain-Reaction (PCR))
    • 3.2.2.  Single-Strand-Conformation-Polymorphism (SSCP) - Methode
    • 3.2.3.  Immunhistochemische Methode
    • 3.2.4.  Interpretation der Immunhistochemie
  • 3.3.  Spezielle Darstellung der Methoden-Protokolle
    • 3.3.1.  Deparaffinierung der Tumorproben
    • 3.3.2.  DNA-Extraktion der Patienten-Proben und Zelllinien
    • 3.3.3.  Protokoll des Hybridisierungs-Assays für K-ras
    • 3.3.4.  PCR–Protokoll für das p53 Gen
    • 3.3.5.  Agarosegel-Nachweis
    • 3.3.6.  Protokoll der SSCP-Methode für p53
    • 3.3.7.  Protokoll der Immunhistochemie von p53
    • 3.3.8.  Geräte, Zubehör und Reagentien
      • 3.3.8.1. Geräte und Zubehör
      • 3.3.8.2. Reagentien
• 4.  Ergebnisse der Analyse des Patienten-Kollektivs mit Plattenepithelkarzinom des Ösophagus
  • 4.1.  Patientenkollektiv und Follow-up
  • 4.2. Mutationsanalyse von K-ras
  • 4.3. Mutationsanalyse von p53
  • 4.4. Immunhistochemische Analyse von p53 Protein
  • 4.5. Statistische Analyse von K-ras und p53
    • 4.5.1.  Box Plot Analysen und Mann-Whitney U-Test
    • 4.5.2. Kaplan-Meier Überlebensanalyse
    • 4.5.3. Uni- und multivariate Analyse
• 5. Diskussion
  • 5.1.  K-ras Mutation
  • 5.2. p53 Mutation
  • 5.3. p53 Expression
  • 5.4. Diagnostische und prognostische Bedeutung von p53
  • 5.5. Therapeutische Bedeutung
  • 5.6. Fazit
• 6. Danksagung
• 7. Literaturverzeichnis
• Erklärung an Eides Statt
• Lebenslauf

Tabellen

• Tab. 1 : Tumor-Nodus-Metastase (TNM)-Stadieneinteilung des Ösophaguskarzinoms nach UICC*
• Tab. 2 : Klinische Stadieneinteilung der Ösophaguskarzinome nach AJCC*
• Tab. 3: Klinische Stadieneinteilung der Ösophaguskarzinome nach UICC
• Tab. 4: Diagnostik und Staging bei Patienten mit Ösophaguskarzinom (87)
• Tab. 5: Präoperative Untersuchungsmethoden zur Risikoabschätzung (87)
• Tab. 6: Therapie des Plattenepithelkarzinoms des Ösophagus (88)
• Tab. 7: Klinisch-pathologische Parameter des Patienten-Kollektivs
• Tab. 8 : Klinisch-pathologische Parameter des Patienten-Kollektivs
• Tab. 9: Univariate Regressions-Analyse nach dem Cox-Proportional-Hazard Model bei Plattenepithelkarzinom des Ösophagus
• Tab. 10: Kreuztabelle zu K-ras (WT versus Mutation) und p53 (WT versus Mutation)
• Tab. 11: Kreuztabelle zu K-ras (WT versus Mutation) und p53 STI (<10% versus ≥10%)
• Tab. 12: Kreuztabelle zu K-ras (WT versus Mutation) und p53 Expression (<10% versus ≥10%)

Bilder

• Abb. 1 : Adenom-Karzinom-Sequenz
• Abb. 2 : Apoptose-Signalwege
• Abb. 3 : Aktivierung und Funktion von p53
• Abb. 4 : SSCP-PCR von p53-Mutationen a) Exon 5, b) Exon 7, c) Exon 8 (Wildtyp (WT) versus Mutation)
• Abb. 5: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus.
• Abb. 6: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus für den Vergleich von p53 Färbeindex (STI) nukleär und zytosolisch (n + z) gefärbter Zellen für a) K-ras Mutation und b) p53 Mutation.
• Abb. 7: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus für den Vergleich von p53 Färbeindex (STI) nukleär und zytosolisch (n + z) gefärbter Zellen für a) UICC-Klassifikation, b) AJCC-Klassifikation.
• Abb. 8: Box Plot Analyse und Mann-Whitney-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus zeigen den Vergleich von p53 Expression nukleär und zytosolisch (n + z) gefärbter Zellen für a) T-Stadium, b) N-Stadium, c) M-Stadium und d) Grading.
• Abb. 9: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus für den Vergleich von nukleärer und zytosolischer (n + z) p53 Expression für a) K-ras Mutation und b) p53 Mutation.
• Abb. 10: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus für den Vergleich von nukleärer und zytosolischer (n + z) p53 Expression für a) UICC-Klassifikation, b) AJCC-Klassifikation.
• Abb. 11: Kaplan-Meier Überlebensanalyse von Patienten mit Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus nach Resektion mit kurativer Absicht für a) T- Stadium, b) N- Stadium, c) M- Stadium, d) Grading.
• Abb. 12: Kaplan-Meier Überlebensanalyse von Patienten mit Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus nach Resektion mit kurativer Absicht für a) K-ras Mutation, b) p53 Mutation.
• Abb. 13: Kaplan-Meier Überlebensanalyse von Patienten mit Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus nach Resektion mit kurativer Absicht für a) UICC-Klassifikation, b) AJCC-Klassifikation.