1.  Zusammenfassung

2.  Einleitung

• 2.1.  Das Plattenepithelkarzinom des Ösophagus

  • 2.1.1.  Modelle zur Tumorgenese ösophagealer Plattenepithelkarzinome

  • 2.1.2.  Ursachen und Risikofaktoren

  • 2.1.3.  Inzidenz

  • 2.1.4.  Mortalitätsraten

  • 2.1.5.  Symptomatik und klinisches Bild

  • 2.1.6.  Diagnostische und prognostische Ansätze

  • 2.1.7.  Therapeutische Ansätze

• 2.2. Molekularbiologische Grundlagen

  • 2.2.1.  Apoptose und Nekrose

  • 2.2.2.  Apoptosesignalwege

  • 2.2.3.  Das Onkogen K-ras

  • 2.2.4.  Zellzyklus und Tumorsuppressorgen p53

• 2.3. Genetische Veränderungen in Tumoren

  • 2.3.1.  Allgemeine Kategorien genetischer Veränderungen in Tumoren

  • 2.3.2.  Genetische Veränderungen von K-ras

  • 2.3.3.  Genetische Veränderungen des p53 Genes

  • 2.3.4.  Genetische Veränderungen in Ösophaguskarzinomen

3.  Patienten, Material und Methoden

• 3.1.  Patienten-Kollektiv der Plattenepithelkarzinome des Ösophagus

• 3.2.  Allgemeine Darstellung der, zur Mutationsanalyse verwendeten Methoden

  • 3.2.1.  Polymerase-Ketten-Reaktion (Polymerase-Chain-Reaction (PCR))

  • 3.2.2.  Single-Strand-Conformation-Polymorphism (SSCP) - Methode

  • 3.2.3.  Immunhistochemische Methode

  • 3.2.4.  Interpretation der Immunhistochemie

• 3.3.  Spezielle Darstellung der Methoden-Protokolle

  • 3.3.1.  Deparaffinierung der Tumorproben

  • 3.3.2.  DNA-Extraktion der Patienten-Proben und Zelllinien

  • 3.3.3.  Protokoll des Hybridisierungs-Assays für K-ras

  • 3.3.4.  PCR–Protokoll für das p53 Gen

  • 3.3.5.  Agarosegel-Nachweis

  • 3.3.6.  Protokoll der SSCP-Methode für p53

  • 3.3.7.  Protokoll der Immunhistochemie von p53

  • 3.3.8.  Geräte, Zubehör und Reagentien

    • 3.3.8.1. Geräte und Zubehör

    • 3.3.8.2. Reagentien

4.  Ergebnisse der Analyse des Patienten-Kollektivs mit Plattenepithelkarzinom des Ösophagus

• 4.1.  Patientenkollektiv und Follow-up

• 4.2. Mutationsanalyse von K-ras

• 4.3. Mutationsanalyse von p53

• 4.4. Immunhistochemische Analyse von p53 Protein

• 4.5. Statistische Analyse von K-ras und p53

  • 4.5.1.  Box Plot Analysen und Mann-Whitney U-Test

  • 4.5.2. Kaplan-Meier Überlebensanalyse

  • 4.5.3. Uni- und multivariate Analyse

5. Diskussion

• 5.1.  K-ras Mutation

• 5.2. p53 Mutation

• 5.3. p53 Expression

• 5.4. Diagnostische und prognostische Bedeutung von p53

• 5.5. Therapeutische Bedeutung

• 5.6. Fazit

6. Danksagung

7. Literaturverzeichnis

Erklärung an Eides Statt

Lebenslauf

Tab. 1 : Tumor-Nodus-Metastase (TNM)-Stadieneinteilung des Ösophaguskarzinoms nach UICC*

Tab. 2 : Klinische Stadieneinteilung der Ösophaguskarzinome nach AJCC*

Tab. 3: Klinische Stadieneinteilung der Ösophaguskarzinome nach UICC

Tab. 4: Diagnostik und Staging bei Patienten mit Ösophaguskarzinom (87)

Tab. 5: Präoperative Untersuchungsmethoden zur Risikoabschätzung (87)

Tab. 6: Therapie des Plattenepithelkarzinoms des Ösophagus (88)

Tab. 7: Klinisch-pathologische Parameter des Patienten-Kollektivs

Tab. 8 : Klinisch-pathologische Parameter des Patienten-Kollektivs

Tab. 9: Univariate Regressions-Analyse nach dem Cox-Proportional-Hazard Model bei Plattenepithelkarzinom des Ösophagus

Tab. 10: Kreuztabelle zu K-ras (WT versus Mutation) und p53 (WT versus Mutation)

Tab. 11: Kreuztabelle zu K-ras (WT versus Mutation) und p53 STI (<10% versus ≥10%)

Tab. 12: Kreuztabelle zu K-ras (WT versus Mutation) und p53 Expression (<10% versus ≥10%)

Abb. 1 : Adenom-Karzinom-Sequenz

Abb. 2 : Apoptose-Signalwege

Abb. 3 : Aktivierung und Funktion von p53

Abb. 4 : SSCP-PCR von p53-Mutationen a) Exon 5, b) Exon 7, c) Exon 8 (Wildtyp (WT) versus Mutation)

Abb. 5: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus.

Abb. 6: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus für den Vergleich von p53 Färbeindex (STI) nukleär und zytosolisch (n + z) gefärbter Zellen für a) K-ras Mutation und b) p53 Mutation.

Abb. 7: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus für den Vergleich von p53 Färbeindex (STI) nukleär und zytosolisch (n + z) gefärbter Zellen für a) UICC-Klassifikation, b) AJCC-Klassifikation.

Abb. 8: Box Plot Analyse und Mann-Whitney-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus zeigen den Vergleich von p53 Expression nukleär und zytosolisch (n + z) gefärbter Zellen für a) T-Stadium, b) N-Stadium, c) M-Stadium und d) Grading.

Abb. 9: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus für den Vergleich von nukleärer und zytosolischer (n + z) p53 Expression für a) K-ras Mutation und b) p53 Mutation.

Abb. 10: Box Plot Analyse und Mann-Whitney U-Test für Plattenepithelkarzinome des Ösophagus für den Vergleich von nukleärer und zytosolischer (n + z) p53 Expression für a) UICC-Klassifikation, b) AJCC-Klassifikation.

Abb. 11: Kaplan-Meier Überlebensanalyse von Patienten mit Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus nach Resektion mit kurativer Absicht für a) T- Stadium, b) N- Stadium, c) M- Stadium, d) Grading.

Abb. 12: Kaplan-Meier Überlebensanalyse von Patienten mit Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus nach Resektion mit kurativer Absicht für a) K-ras Mutation, b) p53 Mutation.

Abb. 13: Kaplan-Meier Überlebensanalyse von Patienten mit Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus nach Resektion mit kurativer Absicht für a) UICC-Klassifikation, b) AJCC-Klassifikation.