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Kapitel 6. Zusammenfassung

Bei der Behandlung disseminierter maligner Neoplasien ist die Chemotherapie mit Hilfe zytostatisch oder zytotoxisch wirksamer Substanzen oftmals die einzige Therapiestrategie mit Aussicht auf Erfolg. Therapielimitierend ist jedoch häufig die Manifestation einer Chemoresistenz, die nicht nur gegen Vertreter einer Stoffklasse gerichtet ist, sondern meist ein breites Spektrum strukturell unterschiedlicher Substanzen einschließt. Dieses als Vielfachresistenz bekannte Phänomen liegt in erster Linie in der Expression zellulärer Proteine begründet, die vielfältig an der Beseitigung und Unschädlichmachung des Therapeutikums beteiligt sind.

Ziel dieser Arbeit ist es, Unterschiede in der Expression auf Proteinebene von chemoresistenten, im Vergleich zur den parentalen Ausgangslinien zu finden, um so neue Faktoren zu detektieren, die mit dem chemoresistenten Phänotyp assoziiert sind.

Für meine Arbeit standen Zellinien eines Fibrosarkomes und Mammakarzinomes, die in vitro gegen Mitoxantron selektioniert wurden und Zellinien von Magenkarzinom, Pankreaskarzinom und Kolonkarzinom zu Verfügung, die einerseits gegen Mitoxantron andererseits gegen Daunorubicin eine Resistenz entwickelt haben. Mit dem Extrakt der zellulären Proteine der parentalen wie auch resistenten Zellklone wurden mit Hilfe der zweidimensionalen Elektrophorese im immobilisierten pH-Gradienten Proteinkarten erstellt, die dann rechnergestützt verglichen wurden. Im Hinblick auf eine vermehrte Bildung eines Genproduktes wurden dann Proteinspots, die sich in den resistenten Zellinie als überexprimiert darstellten, der Sequenzierung zugeführt.

Insgesamt konnten in der zweidimensionalen Elektrophorese acht Proteine identifiziert werden, die in der Sequenzierung ein Ergebnis lieferten: sechs davon waren nicht in der Ausgangszellinie vorhanden und bei zweien fand sich eine vermehrte Expression in der resistenten Zellinie:

Zellinie	Selektion	Protein Spot	Ergebnis der 2-D-Elektrophorese	Ergebnis der Sequenzierung
Magenkarzinom: EPG85-257RNOV	Mitoxantron	1003	Nicht in der Ausgangszellinie vorhanden	Thioredoxin (TRX)
Magenkarzinom: EPG85-257RNOV/ EPG85-257RDB	Mitoxantron/Daunorubicin	2001	Nicht in der Ausgangszellinie vorhanden	Annexin-1
Kolonkarzinom: HT29RNOV	Mitoxantron	3201	Nicht in der Ausgangszellinie vorhanden	Adenin Phos-phoribosyltrans-ferase
Kolonkarzinom: HT29RDB	Daunorubicin	105	Nicht in der Ausgangszellinie vorhanden	BCSG-1
Pankreaskarzinom: EPP85-181RNOV	Mitoxantron	6002	Nicht in der Ausgangszellinie vorhanden	Fettsäurebindendes Protein (FABP)
Pankreaskarzinom: EPP85-181RNOV	Mitoxantron	205	Hochregulation	Stratifin
Pankreaskarzinom: EPP85-181RNOV/ EPP85-181RDB	Mitoxantron/Daunorubicin	6000	Hochregulation	Cofilin
Fibrosarkom: EPF86-079RNOV	Mitoxantron	1202	Nicht in der Ausgangszellinie vorhanden	RHO-GDP Dissoziations Inhibitor-

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Einen Einfluß in die Regulierung des Zellzyklus und der Apoptose sind für Annexin-1, Stratifin, Cofilin und den RHO-GDP-Dissoziationsinhibitor- vorbeschrieben und bekannt. Insbesondere letztere sind dahingehend beschrieben worden Einfluß auf die Verhinderung der Apoptose zu haben, ein im Hinblick auf den Mechanismus der Chemoresistenz wichtiger Aspekt.

Für das im Pankreaskarzinom detektierte fettsäurebindende Protein ist es denkbar, daß es -in Anlehnung an die unspezifischen Transportproteine der Vielfachresistenz- am Auswärtstransport der Chemotherapeutika beteiligt ist.

Die Rolle von BCSG-1 ist noch unklar, allerdings ist diese Protein auch erstmalig vor zwei Jahren beschrieben worden; daher ist über dessen Rolle und Funktion in der Zellphysiologie nur ungenügend bekannt.

Es ergibt sich daraus die Notwendigkeit, die Relevanz der aus der zweidimensionalen Elektrophorese gewonnenen Ergebnisse durch andere Verfahren zu überprüfen, und deren genauen Einfluß zur Ausbildung des chemoresistenten Phänotyps zu charakterisieren.

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