3 Material

3.1  Kits

↓24

Kit

Hersteller

Advantage 2 Polymerase Mix

Clontech

QIAquick PCR Purification Kit

Qiagen

QIAquick Gel Extraction Kit

Qiagen

QIAprep Spin Miniprep Kit

Qiagen

QIAprep Spin Maxiprep Kit

Qiagen

ABI Prism BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit

Perkin Elmer

Quik Change Site-Directed Mutagenesis Kit

Stratagene

Polyfect Transfection Reagent

Qiagen

TUNEL Enzyme

Roche

Oligofectamine

Invitrogen

QIAexpressionist

Qiagen

SulfoLink

Pierce

Quantum RNA 18S Internal Standards

Ambion

T4 DNA Ligase

Promega

Superscript II Reverse Transkriptase

Invitrogen

3.2 Vektoren

Vektor

Hersteller

pEGFP-C1

BD Biosciences Clontech

pEGFP-N1

BD Biosciences Clontech

pEGFP-N2

BD Biosciences Clontech

pEGFP-N3

BD Biosciences Clontech

pBluescript

Stratagene

pCMVTag2A

Stratagene

pCMVTag3A

Stratagene

GpBUDCE4

Invitrogen

pET32a

Novagen

3.3 Puffer

Puffer

Zusammensetzung

Bromphenolblau Ladepuffer

15% Ficoll, 0,25% Bromphenolblau

Xylencyanol Ladepuffer

15% Ficoll, 0,25% Xylencyanol

1xLämmli Puffer

15g Tris, 72g Glycin, 5g SDS, ad 5l H2O

50xTAE

1211,4g Tris, 285ml Eisessig, 93,06g EDTA, ad 5l H2O

10xPEM

1M Pipes, 0,05M EGTA, 0,02M MgCl2

10xPBS

1360mM NaCl, 20mM KCl, 106mM Na2HPO4*2H2O, 15mM KH2PO4

PBST

1xPBS, 0,1% Tween20

5xBlotting Buffer

29,1g Tris, 14,65g Glycin, 18,75ml 10% SDS, ad 1l H2O

2xmagic mix

48% Harnstoff, 15mM Tris pH7,5, 8,7% Glycerin, 1% SDS, 0,004% Bromphenolblau, 143mM ß-Mercaptoethanol

Mounting Medium

90% Glycerin, 0,1M Tris pH8, 2,3% DABCO

DAPI-Medium

0,5µg/µl DAPI in Mounting-Medium

5xSDS-PAGE Puffer

15% ß-Mercaptoethanol, 15% SDS, 1,5% Bromphenolblau, 50% Glycerin

Puffer A

0,32M Sucrose, 4mM Hepes pH 7,4, 1%ß-Mercaptoethanol, Complete Mini Protease Inhibitor

staining Coomassie

1g Coomassie, 400ml Methanol, 100ml Essigsäure, 500µl H2O

destaining Coomassie

400ml Methanol, 100ml Essigsäure, 500µl H2O

3.4 Chemikalien

↓25

Substanz

Hersteller

Agarose

Invitrogen

Sucrose

Gibco

Complete Mini Protease Inhibitor

Roche

Coomassie Brilliant Blue G 250

Serva

DMEM

Cambrex

EMEM

Cambrex

DMEM, phosphatefree

ICN

FCS

Biochrom

Glutamin

Cambrex

non essentiel amino acids

Biochrom

sodium pyruvate

SIGMA

Paraformaldehyd

Merck

TritonX100

SIGMA

BSA (bovine serum albumine)

SIGMA

Rapamycin

SIGMA

Okadaic acid

SIGMA

Forskolin

ICN

ddForskolin

ICN

IBMX (3-Isobutyl-1-methylxanthine)

ICN

Fostriecin

SIGMA

LLnL (N-Acetyl-Leu-Leu-Norleucinal) / Calpain inhibitor I

SIGMA

Lactacystin

SIGMA

LiCl

Merck

Wortmannin

Biomol

CKI-7 (N-(2-aminoethyl)-5-chloro-isoquinoline-8-sulfonamide)

Seikagaku

HePC (Hexadecylphosphocholin)

SIGMA

U73122

Biomol

U73343

Biomol

Bradford Reagenz

SIGMA

dNTP Set

Fermentas

APS (Ammonium Persulfat)

Biorad

SDS (Sodiumdodecylsulfate)

SIGMA

TEMED

Gibco

Acrylamid/bis-Acrylamid 37,5:1

Roth

Tris (Tris(hydroxymethyl)-aminomethan)

Merck

Western lightning Chemiluminescence Reagent

Perkin Elmer

Trypsin

Cambrex

Hepes

Calbiochem

NaCl

Merck

Protein-A-Agarose / Protein-G-Agarose

Roche

Ficoll (Type 400)

Pharmacia

Antipain-dihydrochloride

Roche

Bestatin

Roche

Chymostatin

Roche

E-64

Roche

Leupeptin

Roche

Pepstatin

Roche

Phosphoramidon

Roche

Pefabloc SC

Roche

EDTA-Na2

Roche

Aprotinin

Roche

H3 32PO4 in HCl

Amersham

Pipes

SIGMA

Citrat (tri-Nacitrat-Dihydrat)

Merck

Glycin

Merck

Triethylamin

SIGMA

pd(N)6

Pharmacia

Bromphenolblau

Serva

Xylencyanol

Serva

Essigsäure (Eisessig)

Merck

EDTA

SIGMA

EGTA

SIGMA

MgCl2

Merck

NaCl

Merck

KCl

Merck

Na2HPO4

Merck

KH2PO4

Merck

Harnstoff

Biorad

Glycerin

Merck

ß-Mercaptoethanol

Merck

DABCO (1,4-diazobicyclo-2,2,2-octane)

SIGMA

DAPI (4,6-Diamidino-2-phenylindole-2HCl*H2O)

Serva

DTT

Promega

Ethanol

Merck

Methanol

Merck

Tween 20

SIGMA

3.5 Marker

DNA-Marker

Hersteller

1kb Marker

Gibco

Hyperladder I

Bioline

Protein-Marker

Hersteller

Rainbow Marker

Amersham

Kaleidoskop Marker

Biorad

Seeblue Marker

Invitrogen

3.6 Medien

Medium

Zusammensetzung

LB-Medium

10 g/l Trypton, 5 g/l Hefeextrakt, 10 g/l NaCl, (15 g/l Agar für Platten), Antibiotikum (Ampicillin oder Kanamycin Konzentration: 50 µg/ml)

LB low salt Medium

10 g/l Trypton, 5 g/l Hefeextrakt, 5 g/l NaCl, (15 g/l Agar für Platten), Antibiotikum (Zeocin Konzentration: 50 µg/ml)

3.7 Enzyme

↓26

Enzym

Hersteller

PP2A

Upstate

λ Phosphatase

NEB

LAR Tyrosine Phosphatase

NEB

Thrombin

Novagen

3.8  Antikörper

Antikörper

Hersteller

anti-V5 Antikörper

Invitrogen

anti-c-myc monoclonal Antikörper

Clontech

anti-c-myc polyclonal Antikörper

Santa Cruz

anti-flag Antikörper

Stratagene

anti-tubulin MCA 77s

Serotec

anti-tubulin MCA 78s

Serotec

anti-ubiquitin

Santa Cruz

anti-Aktin

SIGMA

anti-PP2A catalytic subunit

BD Bioscience

anti-α4

Trockenbacher et al., 2001

anti-GFP

Roche

anti-Lamin A/C

Chemicon

anti-GSK3

upstate

Cy3-anti-mouse

Dianova

Cy3-anti-rabbit

Dianova

Cy3-anti-rat

Dianova

FITC-anti-mouse

Dianova

FITC-anti-rabbit

Dianova

HRP-anti-mouse

Dianova

HRP-anti-rabbit

Amersham

HRP-anti-rat

Serotec

normal mouse IgG

Santa Cruz Biotechnologie

3.9  EDV-Programme

Name

Anwendung

Version/Internetadresse

Celera Database

Homologiesuche

www.celera.com

GCG

Sequenzauswertung / Homologiesuche

Wisconsin Package Version 10.2 Genetics Computer Group Madison, Wisc.

STADEN

Sequenzauswertung

Version 1999.0

NCBI

Homologiesuche (blast)

www.ncbi.nlm.nih.gov

Clustalw

Sequenzvergleiche (multiple sequence alignment program)

www.ebi.ac.uk/clustalw/

prosite

Vorhersage von Protein-Domänen (database of protein families und domains)

www.expasy.org/prosite/

pfam

Vorhersage von Protein-Domänen (large collection of multiple sequence alignments and hidden Markov models covering many common protein domains and families)

www.sanger.ac.uk/Software/Pfam/

smart

Vorhersage von Protein-Domänen

http://smart.embl-heidelberg.de


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HTML-Version erstellt am:
17.08.2007