1  EINLEITUNG

• 1.1 Definition der Vaskulitis

• 1.2 Klassifikation der Vaskulitiden

• 1.3  Das Phänomen der Leukozytoklasie

• 1.4 Zielsetzung & Fragestellung

2 Inzidenz, Ätiologie, Klinik und Pathologie der kLV

• 2.1 Inzidenz

• 2.2 Ätiologie

• 2.3 Klinik

• 2.4  Histo- und Immunpathologie

  • 2.4.1 Immunkomplexe

• 2.5 Experimentelle Modelle zum besseren Verständnis von Immunkomplexerkrankungen und vaskulären Reaktionen

  • 2.5.1 Arthus-Reaktion (Tierexperiment: Maus)

  • 2.5.2 Shwartzman-Reaktion

• 2.6 ANCA

• 2.7 Labor

• 2.8 Prognose

• 2.9 Therapie

3 MATERIAL & METHODEN

• 3.1 MATERIAL

  • 3.1.1 Hautbiopsien

  • 3.1.2 Monoklonale Antikörper

  • 3.1.3  Quellen der Reagenzien, Geräte & Materialien

• 3.2 METHODEN

  • 3.2.1 Vorarbeiten

    • 3.2.1.1 Verarbeitung der Hautbiopsien

    • 3.2.1.2 Paraffineinbettung

      • 3.2.1.2.1 Vorbereitung der Paraffinschnitte

    • 3.2.1.3 Gefierbiopsien

      • 3.2.1.3.1 Herstellung von Gefrierschnitten

    • 3.2.1.4 Transmissionselektronenmikroskopie

  • 3.2.2  Histologische, immunhistologische und histochemische Färbemethoden

    • 3.2.2.1 Histologische Übersichtsfärbung mit Hämatoxylin-Eosin (H & E) [170]

      • 3.2.2.1.1 Methodik

    • 3.2.2.2  Immunhistologische Alkalische Phosphatase Anti-Alkalische Phosphatase-Methode

      • 3.2.2.2.1 Prinzip der APAAP-Technik

      • 3.2.2.2.2 Vorblocken

      • 3.2.2.2.3 Stammlösungen für die APAAP-Methode

    • 3.2.2.3 Histochemische TUNEL-Färbung

  • 3.2.3 Mikroskopische Auswertung

    • 3.2.3.1  Beurteilung der Infiltratstärke

    • 3.2.3.2 Bestimmung der Zellzahl

4  ERGEBNISSE

• 4.1 Licht- und elektronenmikroskopische Pathologie der diagnostisch gewonnenen Gewebeproben

  • 4.1.1 Histopathologie

  • 4.1.2 Elektronenmikroskopie

• 4.2 Immunhistologie

• 4.3 Histochemische TUNEL-Färbung

• 4.4  Histopathologie der Histaminquaddeln bei leukozytoklastischer Vaskulitis

  • 4.4.1  Histochemische TUNEL-Färbung der durch Histamin ausgelösten Läsionen

5  DISKUSSION

• 5.1 Histopathologie der Gewebeproben

• 5.2 Licht- und Elektronenmikroskopie der Leukozytoklasie

• 5.3 Apoptose und DNA-Fragmentierung

• 5.4  Expression von Apoptose-regulierenden Proteinen

  • 5.4.1 Expression von CD95 und CD95 Ligand

  • 5.4.2 Expression von bcl-2 und bax

  • 5.4.3  Expression von p53 und p21

• 5.5 Expression charakteristischer und spezifischer Oberflächenrezeptoren

• 5.6 CD68, ein lysosomaler Marker und seine Relevanz für die Apoptose

• 5.7 Abschließende Bemerkungen

6 ZUSAMMENFASSUNG

Tab. 1: Eine Übersicht der verwendeten monoklonalen Antikörper

Tab. 2: Semiquantitative Auswertung der histologischen Alterationen (HE)

Tab. 3: Immunhistologische Auswertung, der CD95- und CD95L-Färbungen

Tab. 4: Immunhistologische Auswertung, der bcl-2- und bax

Tab. 5: Immunhistologische Auswertung, der CD68- und Faktor 8/ vWF-Färbungen

Tab. 6: Immunhistologische Auswertung, der CD16- und CD32-Färbungen

Tab. 7: Beurteilung der histochemischen TUNEL-Färbung (Berlin) im Vergleich mit CD68-positiven Makrophagen

Tab. 8: Ergebnisse der histochemischen TUNEL-Färbung (Münster)

Abb. 1: Klassifikation vaskulitischer Syndrome

Abb. 2: Eine Übersicht der Unterschiede zwischen Apoptose & Nekrose

Abb. 3: Ein Modell zur Entstehung der kLV

Abb. 4: Schema der APAAP-Methode

Abb. 5: Frühes Stadium einer kLV mit zahlreichen desintegrierenden Neutrophilen in perivaskulärer Position. (HE, x 200)

Abb. 6 Späteres Stadium einer kLV mit vorwiegend mononukleärem Infiltrat. (HE, x 200)

Abb. 7: Intakter neutrophiler Granulozyt, der an einer Endothelzelle anhaftet. (EM, x 11.600)

Abb. 8: Im Gewebe liegender neutrophiler Granulozyt mit Schrumpfung des Zelkerns und des Zytoplasmas (EM, x 9.700)

Abb. 9: Neutrophiler Granulozyt mit Vakuolisierung des peripheren Zytoplasmas, das als 'blebbing' bezeichnet wird. (EM, x 13.000)

Abb. 10: Nekrotischer Neutrophiler mit lytischen Veränderungen und apoptotischer Neutrophiler mit Kondensation von Zellkern und Zytoplasma. (EM, x 5.600)

Abb. 11: Makrophage mit Phagolysosomen, die apopto tischen Fragmenten von Granulozyten ent sprechen. (EM, x 5.600)

Abb. 12: Apoptotisches Fragment eines Granulozyten (EM, x15.800)

Abb. 13: Entzündliche Infiltrate mit einzelnen CD95 positiven mononukleären und granulozytären Zellen. Die Interzellularräume der basalen und suprabasalen Epidermis sind ebenfalls positiv angefärbt. (x 400)

Abb. 14: Entzündliches Infiltrat mit einigen CD95L positiven mononukleären Zellen. (x 400)

Abb. 15: bcl-2-positive mononukleäre Entzündungs­zellen. Mehrere dendritische Zellen der Epi dermis sind ebenfalls positiv. (x 400)

Abb. 16: Die Expression von bax ist auf einzelne dendritische Zellen der Epidermis beschränkt. (x 400)

Abb. 17: Einzelne p53-positive mononukleäre Zellen. Die Kerne der basalen Keratinozyten sind häufig positiv. (x 400)

Abb. 18: p21-Färbung ohne positiven Nachweis. (x 400)

Abb. 19: PCNA-positive Zellen sind lediglich in der basalen Epidermis nachweisbar. (x 400)

Abb. 20: Intaktes Blutgefäß in der Färbung mit vWF/Faktor 8. (x 400)

Abb. 21: Weitgehend zerstörte Blutgefäße in der Färbung mit vWF/Faktor 8. (x 400)

Abb. 22: Überwiegend granulozytäres Entzündungs­infiltrat mit einigen CD68- zyten. (x 400)positiven Monozyten

Abb. 23: Überwiegend mononukleäres Entzündungs­infiltrat mit zahlreichen CD68-positiven

Abb. 24: Intakte und desintegrierende neutrophile Granulozyten mit Expression von CD16/ FcγRIII. (x 400)

Abb. 25: Granulozytäre Infiltate ohne Expression von CD32/FcγRII. (x 400)

Abb. 26: TUNEL-Färbung einer Histamin-induzierten kLV mit Aggregaten von positiven granulozytären Fragmenten, die ebenfalls auf das Zytoplasma der Makrophagen beschränkt sind. (x 400)

Abb. 27: TUNEL-Färbung einer Histamin-induzierten kLV mit Aggregaten von positiven granulozytären Fragmenten, die ebenfalls auf das Zytoplasma der Makrophagen beschränkt sind. (x 400)