| Padberg, Jan: Simultane Bestimmung von Dapson, Monoacetyldapson und Pyrimethamin mittels Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) im Blutplasma HIV-seropositiver Patienten |
Aus dem Virchow-Klinikum
Medizinische Fakultät Charité
der Humboldt-Universität zu Berlin
II. Medizinische Klinik
Kommissarischer Leiter: Dr. med. E. Klein
(Ehemaliger Leiter: Prof. Dr. med. H. D. Pohle)
Zur Erlangung der medizinischen Doktorwürde am Virchow-Klinikum
Medizinische Fakultät der Humboldt-Universität zu Berlin
Gutachter:
Prof. Dr. med. Bernhard Ruf
Datum der Einreichung: 1.Mai 1997
Datum der Promotion: 17. April 1998
In Auszügen publiziert in:
Eljaschewitsch J.; Padberg J.; Schürmann D.; Ruf B. High-performance liquid chromatography determination of pyrimethamine, dapsone, monoacetyldapsone, sulfadoxine, and N-acetyl-sulfadoxine after rapid solid-phase extraction. Ther Drug Monit 1996; 18: 592-7.
Gedruckt mit der Genehmigung des Virchow-Klinikums, Medizinische Fakultät Charité der Humboldt-Universität zu Berlin
| Seiten: | [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13] [14] [15] [16] [17] [18] [19] [20] [21] [22] [23] [24] [25] [26] [27] [28] [29] [30] [31] [32] [33] [34] [35] [36] [37] [38] [39] [40] [41] [42] [43] [44] [45] [46] [47] [48] [49] [50] [51] [52] [53] [54] [55] [56] [57] [58] [59] [60] [61] [62] [63] [64] [65] [66] [67] [68] [69] [70] [71] [72] [73] [74] [75] [76] [77] |
Inhaltsverzeichnis | |
| Titelseite | Simultane Bestimmung von Dapson, Monoacetyldapson und Pyrimethamin mittels Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) im Blutplasma HIV-seropositiver Patienten |
| Abkürzungsverzeichnis | Verzeichnis der Verwendeten Abkürzungen |
| 1 | EINLEITUNG |
| 1.1. | Opportunistische Infektionen bei HIV-seropositiven Patienten |
| 1.1.1. | Infektionen durch Pneumocystis carinii |
| 1.1.2. | Prävention der Pneumocystis carinii-Pneumonie |
| 1.1.3. | Infektionen durch Toxoplasma gondii |
| 1.1.4. | Prävention der Toxoplasma gondii-Enzephalitis |
| 1.1.5. | Compliance von HIV-seropositiven Patienten |
| 1.2. | Dapson |
| 1.2.1. | Pharmakodynamik von Dapson |
| 1.2.2. | Pharmakokinetik von Dapson |
| 1.2.3. | Acetyliererphänotyp |
| 1.3. | Pyrimethamin |
| 1.3.1. | Pharmakodynamik von Pyrimethamin |
| 1.3.2. | Pharmakokinetik von Pyrimethamin |
| 1.4. | Antiprotozoale Aktivität von Dapson und Pyrimethamin |
| 1.5. | Methoden der Plasmakonzentrationsbestimmung |
| 1.6. | Zielsetzung |
| 2 | MATERIAL UND METHODE |
| 2.1. | Material |
| 2.1.1. | Geräte der Probenaufbereitung |
| 2.1.2. | Aufbau der Probenaufbereitung |
| 2.1.2.1. | Präparation der Plasmaproben |
| 2.1.2.2. | Extraktionsröhrchen und Konditionierung |
| 2.1.2.3. | Vakuumabsaugeinheit und Extraktion der Plasmaproben |
| 2.1.2.4. | Weiterverarbeitung der Proben |
| 2.1.3. | Geräte der HPLC |
| 2.1.4. | Aufbau der HPLC |
| 2.1.4.1. | Filtration der Eluenten |
| 2.1.4.2. | Entgasung der Eluenten |
| 2.1.4.3. | HPLC-Pumpen |
| 2.1.4.4. | Mischkammer |
| 2.1.4.5. | Injektionssystem |
| 2.1.4.6. | Verbindungselemente |
| 2.1.4.7. | Autosampler |
| 2.1.4.8. | Vorsäule |
| 2.1.4.9. | Chromatographische Trennsäule |
| 2.1.4.10. | Lambda-Selektor und Spektralphotometer |
| 2.1.4.11. | Integrator und Software |
| 2.1.4.12. | Übersicht der HPLC-Anlage |
| 2.1.5. | Chemikalien |
| 2.1.6. | Stamm- und Standardlösungen |
| 2.2. | Entwicklung der Probenaufbereitung |
| 2.2.1. | Auswahl der grundlegenden Methode |
| 2.2.2. | Chromatographische Bedingungen und Konditionierung |
| 2.2.3. | Kapazitätsprüfung mit DDS, MADDS, PYR und IS in Wasser |
| 2.2.4. | Retentionsprüfung mit DDS, MADDS, PYR und IS in Wasser |
| 2.2.5. | Elutionsversuche mit DDS, MADDS, PYR und IS in Wasser |
| 2.2.6. | Verarbeitung von Plasmaproben |
| 2.2.7. | Prüfung verschiedener Waschlösungen |
| 2.2.8. | Retentions- und Elutionsprüfung mit Plasmaproben |
| 2.2.9. | Zusammenfassung der Probenaufbereitung |
| 2.3. | Entwicklung der HPLC-Methode |
| 2.3.1. | Variation der mobilen Phase mit Pic B5 |
| 2.3.2. | Variation der Pic B5 Konzentration |
| 2.3.3. | Erfolgreiche Variation der mobilen Phase mit Pic B6 |
| 2.3.4. | Gradientenelution |
| 2.3.5. | Detektionswellenlängen für DDS, PYR und IS |
| 2.3.6. | Zusammenfassung der HPLC-Methode |
| 2.4. | Validierung der Methode |
| 2.4.1. | Kalibration und Auswertung |
| 2.4.2. | Überprüfung der Methode |
| 2.5. | Prophylaxe mit Pyrimethamin und Dapson |
| 2.5.1. | Patientenkollektiv |
| 2.5.2. | Abnahme der Proben |
| 2.5.3. | Compliance |
| 3 | ERGEBNISSE |
| 3.1. | Validität der Methode |
| 3.1.1. | Wiederfindung |
| 3.1.2. | Präzision |
| 3.1.3. | Sensitivität |
| 3.1.4. | Spezifität |
| 3.1.5. | Linearität |
| 3.2. | Compliance |
| 3.3. | Medikamentenspiegel |
| 3.4. | Acetyliererphänotyp |
| 3.5. | Wirksamkeit der Prophylaxe |
| 3.6. | Routineeinsatz der Methode |
| 4 | DISKUSSION |
| 5 | Zusammenfassung |
| Bibliographie A | Literatur |
| Lebenslauf | |
| Danksagung | |
Tabellenverzeichnis | |
| TABELLE 1: | Erstmanifestation von AIDS in den aufgeführten Zeiträumen in der BRD (Quartalsbericht II/96 des AIDS-Zentrums im Robert Koch-Institut |
| TABELLE 2: | Opportunistische Infektionen in den aufgeführten Zeiträumen in der BRD (Quartalsbericht II/96 des AIDS-Zentrums im Robert Koch-Institut) |
| TABELLE 3: | Randomisierte Studien zur Prophylaxe der Pneumocystis carinii-Pneumonie |
| TABELLE 4: | Mittelwerte der steady-state Plasmakonzentrationen von Dapson und Pyrimethamin nach 24, 72 und 120 Stunden |
| TABELLE 5: | Standardlösungen von PYR, DDS und MADDS |
| TABELLE 6: | Kalibrationspunkte von PYR, DDS und MADDS. |
| TABELLE 7: | Charakteristische Daten der Patientenkollektivs |
| TABELLE 8: | Wiederfindung von PYR, DDS, und MADDS |
| TABELLE 9: | Variationskoeffizienten von PYR, DDS und MADDS in Serie und von Tag-zu-Tag |
| TABELLE 10: | Plasmakonzentrationen von Pyrimethamin, Dapson und Monoacetyldapson |
| ABBILDUNG 1: | Strukturformeln von Dapson und Hauptmetabolit Monoacetyldapson |
| ABBILDUNG 2: | Strukturformeln von Pyrimethamin und Sulfadimethoxin (IS) |
| ABBILDUNG 3: | Schematische Darstellung des chromatographischen Meßplatzes |
| ABBILDUNG 4: | Retentionszeiten bei Variation der organischen Eluenten |
| ABBILDUNG 5: | Retentionszeiten bei höherem Wasseranteil |
| ABBILDUNG 6: | Retentionszeiten bei Variation der Konzentration von Pic B5 |
| ABBILDUNG 7: | Retentionszeiten unter Variation der organischen Eluenten mit Pic B6 |
| ABBILDUNG 8: | Peakhöhen bei Variation der Detektionswellenlänge |
| ABBILDUNG 9: | Chromatogramm einer Plasmaprobe ohne Pharmaka |
| ABBILDUNG 10: | Chromatogramm einer Plasmaprobe mit DDS (1,0 µg/ml), MADDS (0,25µg/ml), IS und PYR (0,5 µg/ml). Die Retentionszeiten von DDS (4,62 Min.), MADDS (5,95 Min.), IS (9,42 Min.) und PYR (14,23 Min.) sind entsprechend notiert. |
| ABBILDUNG 11: | Repräsentative Kalibrationskurven von DDS und MADDS |
| ABBILDUNG 12: | Repräsentative Kalibrationskurve von Pyrimethamin |
| ABBILDUNG 13: | Boxplots der steady-state Plasmaspiegel von Dapson in ng/ml |
| ABBILDUNG 14: | Boxplots der steady-state Plasmaspiegel von Monoacetyldapson in ng/ml |
| ABBILDUNG 15: | Boxplots der steady-state Plasmaspiegel von Pyrimethamin in ng/ml |
| ABBILDUNG 16: | Anzahl von Patienten mit bestimmten MADDS/DDS-Plasmaspiegel-quotienten |
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HTML - Version erstellt am: Mon Jul 13 12:38:07 1998 |