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Kapitel 2. Material

2.1. Puffer und Lösungen

1x TBE:	0,089 M Tris-HCl pH 7,5
	0,089 M Borat
	0,02 M EDTA

20x SSC:	3 M NaCl
	0,3 M Natriumcitrat

20x SSPE:	3,6 M NaCl
	0,2 M Natriumphosphat
	0,02 M EDTA
	pH 7,7

1x PBS:	0,0015 M KH2PO4
	0,008 M Na2HPO4
	0,0027 M KCl
	0,139 M NaCl

Stop-Lösung:	98% Formamid
	10 mM EDTA
	0,025% Bromphenolblau

DEPC-H2O:	1 l Aqua bidest.
	1 ml Diethylpyrocarbonat
	über Nacht unter dem Abzug einwirken lassen
	autoklavieren

2.2. Medien

1x LB-Medium:	1% Bacto Tryptone (Difco)
	0,5% Bacto Yeast Extract (Difco)
	1% NaCl

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1x LBAgar:

LB-Medium mit 1,5 % Bacto Agar (Difco)

YT-Broth-Medium:	1,6% Bacto Tryptone (Difco)
	1% Bacto Yeast Extract (Difco)
	0,5% NaCl

RPMI-Medium:	RPMI 1640 (PAA)
	10% FKS
	1% Glutamin

L15-Medium:	10% FKS
	0,5% Glutamin

Waymouth’s-Medium:	Waymouth MB 752/1 (SIGMA)
	pro Liter 29,9 ml Natriumbicarbonat (7,5% w/v)
	pH 7,0
	10% FKS

McCoys-Medium:	McCoys 5A-Medium (GIBCO BRL)
	10% FKS
	1% Glutamin

Einfriermedium (für humane Zellen):

	95% FKS
	5% DMSO

2x Bakterien-Einfriermedium:

	8,25 g K2HPO4*3H2O
	1,80 g KH2PO4
	0,45 g Na-Citrat*2H2O
	0,09 g MgSO4*7H2O
	5,90 g (NH4)2SO4
	35,75 ml 87%-iges Glycerol
	auf 500 ml H2O auffüllen, autoklavieren

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2.3. Zellinien

Tab. 3: Auflistung der in der Arbeit verwendeten Tumorzellinien

Name	Diagnose	Herkunft	Medium
H526	Kleinzeller	ATCC	RPMI
H209	Kleinzeller	ATCC	RPMI
D-51	Adenokarzinom	Charité	L15
D-54	Adenokarzinom	Charité	L15
D-97	Großzelliges Karzinom	Charité	L15
D-117	Adenokarzinom	Charité	L15
BEN	Metastase NSCLC	DSMZ	DMEM+4,5 g Glucose
DMS79	Kleinzeller	ATCC	Waymouth's
H82	Kleinzeller	ATCC	RPMI
CPC-N	Kleinzeller	DSMZ	McCoys
COLO-668	Metastase von Kleinzeller	DSMZ	RPMI
COLO-677	Kleinzeller	DSMZ	RPMI
COLO-699	Adenokarzinom	DSMZ	RPMI
H446	Kleinzeller	ATCC	RPMI
DMS114	Kleinzeller	ATCC	Waymouth's
H1688	Metastase von Kleinzeller	ATCC	RPMI
H187	Kleinzeller	ATCC	RPMI
H378	Kleinzeller	ATCC	RPMI
DV-90	Adenokarzinom	DSMZ	RPMI
SHP77	Großzelliges Karzinom	ATCC	RPMI
A427	Nichtkleinzeller	ATCC	RPMI
N417	Kleinzeller	ATCC	RPMI

2.4. Tumormaterial

Die Arbeiten basieren auf insgesamt drei Tumorkollektiven. Zum einen wurden Proben von Autopsien, die an der Pathologie der Charité, dem Pathologischen Institut der Christians-Albrecht-Universtät Kiel und dem Department für Pathologie der Universität Zürich durchgeführt wurden, untersucht. Tumor- und

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Bei den weiteren Kollektiven handelt es sich um Resektate von Patienten mit einem Karzinom der Lunge, die an der Charité von Herrn Prof. Gellert operiert wurden. Das Gewebe vom Primärtumor, etwaigen Metastasen und konstitutionellem Normalgewebe wurde innerhalb von 30 min in Flüssigstickstoff schockgefroren und bei -80°C bis zur Aufarbeitung asserviert. Aus angelegten Primärkulturen wurden die Zellinien D51, D54, D97 und D117 etabliert (siehe Abschnitt 2.3 ).

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