| ▼ 39 (fortgesetzt) |
Von den 52 Patienten erhielten 44 Patienten eine Kadaverspende, wovon 32 mit einer immunsuppressiven Therapie bestehend aus anti-IL2R-mAk (Basiliximab), Calcineurininhibitor (Tacrolimus n = 31, Ciclosporin A n = 1), Mycophenolat Mofetil (MMF) und Methylprednisolon (MP), drei mit Tacrolimus, dem Leflunomidanalogon FK778 und MP (wobei nach drei Monaten FK 778 gegen MMF ersetzt wurde) und sieben der Patienten mit FTY720, Ciclosporin A und MP behandelt wurden. Zwei der Patienten, die eine Kadaverspende erhielten, waren durch frühere Transplantationen mit einem rejektionsassoziierten frühen Organverlust sensibilisiert und erhielten eine spezielle Induktionstherapie bestehend aus einer Niedrigdosis OKT3, anti-TNF-mAk (Etanercept) und anti-CD20-mAk (Rituximab) perioperativ sowie fünf Plasmapheresen postoperativ. Danach wurde auf konventionelle Immunsuppression mit Tacrolimus und MP umgestiegen. Acht Patienten erhielten ein Transplantat von einem Lebendspender und wurden mit anti-IL2R-mAk (Basiliximab), Ciclosporin A, MMF und MP behandelt. Ein Patient der Studie war Asiat, alle anderen Kaukasier. Weitere wichtige Charakteristika der untersuchten Patientengruppe sind in Tabelle 1 zusammengefasst.
Tabelle 1 Charakterisrika der untersuchten Patienten, n = 52
| ▼ 40 |
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10 ml Zitratmonovetten |
SARSTEDT, Nümbrecht, Deutschland |
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14 ml „Cellstar“ Polypropylenröhrchen |
Greiner GmbH, Frickenhausen, Deutschland |
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2070 FALCON-Röhrchen (50 ml) |
Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland |
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2052 FALCON-Röhrchen (15 ml) |
Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland |
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FALCON-Glaspipetten, steril (2-25 ml) |
Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland |
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Sterile Transferpipetten |
SARSTEDT, Nümbrecht, Deutschland |
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Sterile Pipettenspitzen (100 μl, 1000 μl) |
SARSTEDT, Nümbrecht, Deutschland |
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Sterile Pipettenspitzen (20 µl) |
Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland |
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Eppendorfgefäße (0,5-2 ml) |
Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland |
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Zellkulturflaschen (50 ml, 100 ml) |
Greiner GmbH, Frickenhausen, Deutschland |
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Sterile Filtersysteme (500 ml) |
Corning Incorporated, Corning, N.Y.,USA |
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FALCON-Zellkulturschalen |
Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland |
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FALCON-„Cellstrainer“ (100 µm mesh) |
Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland |
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Einmalspritzen, steril (10 ml) |
Braun, Melsungen ,Deutschland |
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Einmal-Skalpelle |
Becton Dickinson, N.Y.,USA |
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Objektträger |
Menzel-Gläser A1, Essex, England |
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Prä-Separations Filter |
Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach,Deutschland. |
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LD-MACS-Zellseparationssäulen |
Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Deutschland |
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FALCON 96-Well-Mikrotestplatten |
Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland |
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Tieffrierröhrchen (1,8 ml) |
Nunc Inter Med, Roskilde, Dänemark |
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96-Well-Multiscreen Mikrotitierplatten |
Millipore Corporation, Bedford, USA |
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Pipetten (10-1000 µl) |
Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland |
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12-Kanal-Pipetten (30-300 µl) |
Eppendorf AG, Hamburg, Deutschland |
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Röhrchenständer |
Neolab, Heidelberg, Deutschland |
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Neubauer-Zählkammer |
Feinoptik, Bad Blankenburg, Deutschland |
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MACS-MultiStand |
Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Deutschland |
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MidiMACS, Magnet |
Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Deutschland |
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5100 Cryo 1 °C Freezing Container |
Nalge Nunc International, Rochester, USA |
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FACSCalibur-Durchflusszytometer |
Becton Dickinson, Heidelberg, Deutschland |
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Zentrifuge Centrifuge 5810 |
Eppendorf, Hamburg, Deutschland |
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Kühlzentrifuge,CR4 22 |
Jouan, Saint Nazaire, Frankreich H GmbH, |
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Schüttler,Vortex-Genie2 |
Scientific Industries, INC, Bohemia, USA |
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Absaugpumpe Laboport |
Neuberger, Freiburg, Deutschland |
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Pipettierhilfe Pipetus R Standard |
Labinstruments GmbH, Crailsheim,Deutschland |
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Brutschrank EG 110 R |
Jouan, Saint Nazaire, Frankreich |
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Lichtmikroskop |
Olympus, Tokio, Japan |
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Tiefkühltruhe BT 02 (2722) |
COTECH GmbH, Berlin, Deutschland |
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BIOreader R 3000C |
BioSys GmbH, Leverkusen, Deutschland |
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Wannenbad |
Grant Instruments, Cambridge, UK |
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Laminar-Flow-Box |
Kendo, Hanau, Deutschland |
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Blutbestrahlungsgerät IBL-437C |
CIS biointernational, Gif-Sur-Yvette,Frankreich |
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phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) |
DULBECCO´s, GIBCO, Großbritannien |
| ▼ 41 |
Kulturmedium
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1640 RPMI-Medium (500 ml) |
Biochrom KG, Berlin, Deutschland |
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+50 ml Fetales Kälberserum |
Biochrom KG, Berlin, Deutschland |
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+2 mM L-Glutamin |
Biochrom KG,Berlin, Deutschland |
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+100 I.E. Penicillin/ Streptavidin |
Invitrogen, Karlsruhe, Deutschlan |
♢Nach dem Mischen wurde steril gefiltert.
| ▼ 42 |
„Blocking Solution“ PBS-BSA
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500 ml phosphatgepuff. Kochsalzlösung |
DULBECCO´s, GIBCO, Großbritannien |
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+5 g Bovines Serum Albumin |
SERVA, Heidelberg, Deutschland |
♢Nach dem Mischen wurde steril gefiltert.
| ▼ 43 |
„Washing Solution“ PBS-Tween
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500 ml phosphatgepuff. Kochsalzlösung |
DULBECCO´s, GIBCO, Großbritannien |
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+250 µl Tween 20 |
SERVA, Heidelberg, Deutschland |
PBS-Tween-BSA
| ▼ 44 |
|
500 ml phosphatgepuff. Kochsalzlösung |
DULBECCO´s, GIBCO, Großbritannien |
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+5 g Bovines Serum Albumin |
SERVA, Heidelberg, Deutschland |
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+250 μl Tween 20 |
SERVA, Heidelberg, Deutschland |
Tieffriermedium
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50 ml Fetales Kälberserum |
Biochrom KG, Berlin, Deutschland |
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+10 % Dimethylsulfoxid (DMSO) |
SIGMA, Steinheim, Deutschland |
| ▼ 45 |
♢ Vor der Verwendung musste der MACS-Puffer entgast werden.
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500 ml phosphatgepuff. Kochsalzlösung |
DULBECCO´s, GIBCO, Großbritannien |
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+0,5 % Bovines Serum Albumin |
SERVA, Heidelberg, Deutschland |
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+2 mM EDTA |
SIGMA, Steinheim, Deutschland |
FACS-Puffer
| ▼ 46 |
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500 ml phosphatgepuff. Kochsalzlösung |
DULBECCO´s, GIBCO, Großbritannien |
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+0,5 % Bovines Serum Albumin |
SERVA, Heidelberg, Deutschland |
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+0,1 % Natriumazid (NaN3) |
SERVA, Heidelberg, Deutschland |
AEC-Lösung
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100 mg AEC (3-Amino-9-Ethyl-Carbazol) |
SIGMA, Steinheim, Deutschland |
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in 10 ml DMF (N,N Dimethylformamid) |
Merck KGaA, Darmstadt, Deutschland |
| ▼ 47 |
AEC-Puffer
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148 ml 0,2 M Essigsäure |
Merck KGaA, Darmstadt, Deutschland |
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+352 ml 0,2 M Natrium-Azetatlösung |
SIGMA, Steinheim, Deutschland |
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+500 ml Aqua dest. |
Braun, Melsungen, Deutschland |
♢Der pH-Wert wurde auf 5 eingestellt.
| ▼ 48 |
weitere Chemikalien
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Ficoll-PaqueTM PLUS |
Amersham Bioscience, Uppsala, Sweden |
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Rotipuran ® 2-Propanol |
Carl Roth GmbH&Co, Karlsruhe, Deutschland |
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Biotin |
Endogen, Illinois, USA |
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Streptavidin HRP |
Dako, Glostrup, Dänemark |
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Trypanblau 1 % |
Fluka Chemie, Buchs, Deutschland |
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Essigsäure (Eisessig) |
Merck KGaA, Darmstadt, Deutschland |
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H2O230 % |
SIGMA, Steinheim, Deutschland |
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Ethanol 70 % |
Merck, Darmstadt, Deutschland |
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Sandimmun ®(Optoral) Lösung 1 ml |
Novartis Pharma GmbH, Nürnberg, Deutschland |
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Prograf ® (tacrolimus injection) 1 ml |
Fujisawa GmbH, München, Deutschland |
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Phytohemagglutinin (PHA) |
SIGMA, Steinheim, Deutschland |
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CMV-pp65-Gesamtpeptidmischung |
Jerini Biotools, Berlin, Deutschland |
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IFNγ-Primärantikörper |
Endogen, Illinois, USA |
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IFNγ-Sekundärantikörper |
Endogen, Illinois, USA |
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Anti-CD2 MicroBeads |
Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, |
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Anti-CD3-APC |
Becton Dickinson, San Jose, USA |
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Anti-CD45-PerCP |
Becton Dickinson, San Jose, USA |
| ▼ 49 |
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SPSS 11.5 für Windows |
SPSS Inc., Chicago, USA |
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MS Office 2003 |
Microsoft Corp.; Redmont, USA |
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CellQuest Pro |
Becton Dickinson, San Jose, USA |
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