Aus der Klinik für Dermatologie
der Medizinischen Fakultät
der Charité – Universitätsmedizin Berlin

DISSERTATION

Immunhistologische Untersuchungen an primären Melanomen und deren Metastasen mit SM5-1, einem neuen monoklonalen
Antikörper

Zur Erlangung des akademischen Grades
Doctor medicinae (Dr. med.)

vorgelegt der Medizinischen Fakultät der Charité – Universitätsmedizin Berlin

Von
Susanne Reinke
aus Berlin

Dekan: Prof. Dr. med. Joachim W. Dudenhausen

Dekan: Prof. Dr. med. Martin Paul

Gutachter:
1. Prof. Dr. med. W. Sterry
2. Prof. Dr. med. W. Stolz
3. Prof. Dr. med. K. Neuber

Datum der Promotion:18.10.2004

Meiner Familie und Jan

Was ist das Schwerste von allem?
Was dir das Leichteste dünket
Mit den Augen zu sehen,
Was vor den Augen dir liegt.

J. W. v. Goethe 1893

Inhaltsverzeichnis

• 1.  Einleitung
  • 1.1 Definition des malignen Melanoms
  • 1.2 Klassifikation des malignen Melanoms
  • 1.3  Metastasierung des malignen Melanoms
  • 1.4 Differentialdiagnosen des malignen Melanoms
  • 1.5 Epidemiologie und Risikofaktoren
  • 1.6 Einteilungen des malignen Melanoms
  • 1.7  Diagnostik
    • 1.7.1 Immunhistologie
• 2.  Fragestellung
• 3.  Material und Methoden
  • 3.1 Gewebeproben
  • 3.2 Gewebearten
  • 3.3 Herstellung von Paraffinschnitten
  • 3.4 Entparaffinierung und Gewebevorbehandlung
  • 3.5 Generierung des Antikörpers SM5-1
  • 3.6 Verwendete Antikörper
  • 3.7  Immunhistochemisches Färben
    • 3.7.1 Avidin/Streptavidin-Biotin-Methode
    • 3.7.2 Durchführung der immunhistochemischen Färbungen
  • 3.8 Auswertung der histologischen Schnitte
  • 3.9  Übersicht verwendeter Materialien und Geräte
• 4.  Ergebnisse
  • 4.1 Die Expression des durch SM5-1 erkannten Antigens in der Haut und anderen normalen humanen Geweben
  • 4.2  Melanozytäre Nävi
  • 4.3 Färbungen durch den Antikörper SM5-1 bei nicht-melanozytären Tumoren
  • 4.4  Immunhistochemisches Färbeverhalten von SM5-1 an primären malignen Melanomen
  • 4.5 Immunhistochemie des monoklonalen Antikörpers SM5-1 bei Melanommetastasen
  • 4.6  Vergleich der Antigenexpression des Antikörpers SM5-1 in primären Melanomen mit Antikörpern gegen Melan-A/MART-1 (A103) und Tyrosinase (T311)
  • 4.7  Antigenexpression des Antikörpers SM5-1 im Vergleich mit Melan-A/MART-1 und Tyrosinase an Melanommetastasen
  • 4.8 Expression von SM5-1, Melan-A/MART-1 und Tyrosinase bei primären und metastasierten Melanomen
  • 4.9  Färbeintensitäten für SM5-1, A103 und T311 bei primären und metastasierten Melanomen
  • 4.10 Konkordanter Verlust der Antigene für Melan-A/MART-1 und Tyrosinase bei primären oder metastasierten Melanomen
• 5.  Diskussion
  • 5.1 Spezifität des Antikörpers SM5-1
  • 5.2  Sensitivität des Antikörpers SM5-1 für primäre und metastasierte Melanome
  • 5.3  Antigenexpression von SM5-1, Melan-A/MART-1 und Tyrosinase in primären und metastasierten Melanomen
  • 5.4  Färbeintensitäten von SM5-1, A103 und T311
  • 5.5 Färbemuster von SM5-1 innerhalb einer Tumorzellpopulation im Vergleich zu A103 und T311
  • 5.6 Konkordanter Antigenverlust bei primären und metastasierten Melanomen
  • 5.7 Schlussfolgerungen über den Antikörper SM5-1
• 6.  Zusammenfassung
• 7. Literaturverzeichnis
• 8. Publikation
• 9. Eidesstattliche Erklärung
• 10. Danksagung

Tabellen

• Tabelle 1Tumoreindringtiefe nach Clark⁽⁷⁾
• Tabelle 2Tumordicke des Primärtumors nach Breslow⁽⁷⁾
• Tabelle 3 Klinische Stadieneinteilung nach UICC (Union Internationale Contre le Cancer)⁽⁷⁾
• Tabelle 4 TNM-Klassifikation nach AJCC 2001 (American Joint Commitee on Cancer)⁽¹⁷⁾
• Tabelle 5 Klinische Stadieneinteilung nach AJCC 2001 (American Joint Commitee on Cancer)⁽¹⁷⁾
• Tabelle 6 Verwendete Antikörper
• Tabelle 7 Reaktivität von SM5-1 mit normalem humanem Gewebe
• Tabelle 8 Reaktivität von SM5-1, HMB-45 und anti-S100 mit melanozytären Nävi bei in Paraffin fixierten Proben
• Tabelle 9 Reaktivität von SM5-1, HMB-45 und anti-S100 mit nicht-melanozytären Tumoren bei in Paraffin fixierten Proben (n = 84)
• Fortsetzung Tabelle 9
• Tabelle 10 Reaktivität von SM5-1, HMB-45 und anti-S100 mit primären Melanomen und Melanommetastasen bei in Paraffin eingebetteten Proben.
• Tabelle 11 Reaktivität von SM5-1, A103 und T311 beim primären und metastasierten Melanom bei in Paraffin eingebetteten Proben
• Tabelle 12 Reaktivität von SM5-1, A103 und T311 beim primären und metastasierten Melanom in Prozent der positiven Zellen
• Tabelle 13 Färbeintensitäten von SM5-1, A103 und T311 beim primären und metastasierten Melanom
• Tabelle 14 Melanommetastasen mit konkordantem Verlust von zwei oder mehr Antigenen- durch SM5-1, Melan-A/MART-1 oder Tyrosinase erkannt

Bilder

• Abbildung 1: Bei der ABC/SABC-Methode reagiert der Avidin/Streptavidin-Biotin-Komplex mit dem biotinylierten Sekundärantikörper.(57) Bei der LAB/LSAB-Methode reagiert enzymmarkiertes Avidin/Streptavidin mit dem biotinylierten Sekundärantikörper.(57)
• Abbildung 2: Immunfärbungen von melanozytären Tumoren mit SM5-1. Beachtenswert ist das homogene Färben der Compound-nävuszellen, während die nicht aktivierten basalen Melanozyten negativ sind (A: Vergr. x200). Bei dem In-situ-Melanom (B: Vergr. x82,5), dem nodulären Melanom (Clark IV, Breslow 2,16 mm; C: Vergr. x92) und der Lymphknotenmetastase eines Melanoms (D: Vergr. x250) reagiert SM5-1 mit der vollständigen Tumorzell-population.
• Abbildung 3: Lymphknotenmetastase eines malignen Melanoms, immungefärbt mit SM5-1 (A: Vergr. x200) und HMB-45 (B: Vergr. x200). Die Färbung von SM5-1 ist homogen und intensiv, während durch HMB-45 keine Zellen markiert wurden.