Aus dem Institut für Transfusionsmedizin - Campus Virchow-Klinkum
der Medizinischen Fakultät der Charité - Universitätsmedizin Berlin

Dissertation

Particle Gel Immuno Assay (ID-PaGIA) zum Nachweis von anti-IgA Antikörpern

Zur Erlangung des akademischen Grades
Doctor medicinae (Dr. med.)

vorgelegt der Medizinischen Fakultät der Charité -
Universitätsmedizin Berlin

von
Kai Oliver Schönhage
aus
Bielefeld

Gutachter:
1. Prof. Dr. med. N. Müller
2. Prof. Dr. med. E. Köttgen
3. Prof. Dr. med. A. Salama

Datum der Promotion:10. Mai 2005

WIDMUNG

Meinen Eltern Roswitha Kreuer und Hans-Jürgen Schönhage.

Für die Standfestigkeit der einen und die Umtriebigkeit des anderen.

Inhaltsverzeichnis

• 1  EINLEITUNG UND FRAGESTELLUNG
• 2  GRUNDLAGEN
  • 2.1  ANTI-IGA ANTIKÖRPER
    • 2.1.1  Immunglobulinklassen der anti-IgA Antikörper
    • 2.1.2 Pathogenese
    • 2.1.3 Transfusionsreaktionen durch IgA
    • 2.1.4 Erkrankungen mit Nachweis von anti-IgA
  • 2.2  BISHERIGE TESTMETHODEN zum NACHWEIS von ANTI-IGA ANTIKÖRPERN
    • 2.2.1 IgA als Testantigen
    • 2.2.2 Passiver Hämagglutinations Assay (PHA)
      • 2.2.2.1 Röhrchentest
    • 2.2.3 ELISA und RIA
• 3  MATERIAL UND METHODEN
  • 3.1 LÖSUNGEN
    • 3.1.1 LISS
    • 3.1.2 Aufbewahrungslösung
    • 3.1.3 Chromchloridlösung
  • 3.2  IMMUNGLOBULINE / ANTIKÖRPER
    • 3.2.1 IgA
    • 3.2.2 Antiglobulinseren
  • 3.3  Gelkartentest - Micro-Typing System
  • 3.4  PaGIA-BEADS
  • 3.5  HERSTELLUNG der PaGIA-BEADS
  • 3.6  HERSTELLUNG der TESTERYTHROZYTEN
    • 3.6.1 Negativkontrollen
    • 3.6.2  Optimierung der Kopplung
  • 3.7  GEWINNUNG und AUFBEREITUNG der SEREN
  • 3.8  NACHWEISMETHODEN von ANTI-IGA ANTIKÖRPERN
    • 3.8.1 Prinzip des Gelkartentests
    • 3.8.2 Particle Gel Immuno Assay (PaGIA)
    • 3.8.3 Passive Hämagglutination (PHA) - Gelkartentest
    • 3.8.4 PHA – Röhrchentest
    • 3.8.5 IgA-Testerythrozyten
  • 3.9  BESTIMMUNG der IMMUNGLOBULINKONZENTRATIONEN
    • 3.9.1 Testprinzip
• 4  ERGEBNISSE
  • 4.1 Immunglobulinkonzentrationen
  • 4.2 IgA-Kopplung
  • 4.3  NACHWEIS von Anti-IgA im Serum
    • 4.3.1 Normalseren
    • 4.3.2  Patientenseren
    • 4.3.3 Spezifität
    • 4.3.4 Vergleich der Methoden
• 5  DISKUSSION
• 6  ZUSAMMENFASSUNG
• LITERATURVERZEICHNIS
• DANKSAGUNG
• ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS
• VERÖFFENTLICHUNGEN
• LEBENSLAUF
• ERKLÄRUNG an EIDES STATT

Tabellen

• Tabelle 1: Meßbereiche und Normalwerte (g/l) für IgA, IgG und IgM
• Tabelle 2: Reaktivität der Antiglobulinseren mit den Beads und IgA-Testery­throzyten
• Tabelle 3: Immunglobulinkonzentrationen (g/l) und Reaktionen der normalen Serumproben
• Tabelle 4: Immunglobulinkonzentration (g/l) und Reaktionen der Serumproben von Patienten mit IgA-Mangel bzw. CVID (n.b.: nicht bekannt; n.u.: nicht untersucht; ↓/↑: unter-/oberhalb Normalbereich)
• Tabelle 5: Titer im PaGIA von 8/99 bis 2/00
• Tabelle 6: positive und negative Reaktionen der beiden Testmethoden
• Tabelle 7: Spezifität und Titer der Antikörper (PaGIA)
• Tabelle 8: Vergleich der Methoden

Bilder

• Abbildung 1: Nachweis von IgA auf Erythrozyten / Gelmatrix mit Agglutinaten
• Abbildung 2: Schema der Reaktionsmuster im Gelkartentest