Qualitätskontrolle von Blutkomponenten nach GMP  („Good Manufacturing Practice“)Susanne Schüler I3I.1I.1.1I.1.24I.1.356I.27II8II.1II.29101112131415161718II.3II.3.112#2319299#21332#442021241#24359#4122149#44II.3.223II.3.324II.4II.4.12526II.4.227II.4.328II.4.4II.5II.629III30III.131323334353637383940III.241557#240546#20642557#222557#205IV43IV.1IV.244IV.34546IV.44748IV.54950IV.6515253IV.754IV.85556 Abkürzungsverzeichnis Literaturverzeichnis575859606162 Danksagung63 Anhang64 Eidestattliche Erklärung65deInhaltsverzeichnisHilfe Ergebnisse
Qualität der Blutprodukte

Die hier erwähnten Richtlinien entstammen dem “Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components”[COUNCIL OF EUROPE, 1992].

Hier werden sich überschneidende Messungen aus den Abschnitten 1 und 2 der Versuchsplanung in gemeinsame Tabellen übernommen. So sind die unterschiedliche Probenzahlen (n) zu erklären.

Kenngrößen

n

MW±SD

Richtlinien

Am Herstellungstag

Beutelvolumen

[ml]

83

548,6±30,2

-

Spendevolumen

[ml]

12

488,9±30,2

450±10%

Hämoglobin

[g/ l]

83

13,4±1,4

-

Hämatokrit

[%]

83

39±4,1

-

Basophile

[%]

71

0,93±1,36

-

Eosinophile

[%]

71

2,17±1,83

-

Stabkernige

[%]

71

4,39±2,94

-

Monozyten

[%]

71

4,76±3,19

-

Lymphozyten

[%]

71

30,1±10,4

-

Segmentkernige

[%]

71

55,3±12,2

-

am Ende der Haltbarkeit (28 Tage)

Hämoglobin

[g/ dl]

12

13,4±1,5

-

freies Hämogl.

[mg/ dl]

12

91,6±42,5

-

Hämatokrit

[%]

12

39,1±4,1

-

Hämolyserate

[%]

12

0,4±0,2

<0,8
Tabelle 1: Auswertung Vollblutkonserve

85,5% der Proben liegen über der Höchstmarke für das Spendevolumen, nur 12% halten das vorgeschriebene Volumen ein. Nur bei einer Probe ist die Hämolyserate geringfügi>0,8. Bei der Untersuchung auf Hämolysine zeigten 16,6% Hämolysin A und 8,3% Hämolysin B.

Kenngrößen

 

n

MW±SD

Richtlinien

Am Herstellungstag

Beutelvolumen

[ml]

12

225,4±12,3

250±50

Hämoglobin

[g/ dl]

12

22,3±0,87

-

Hämoglobin

[g/EK]

12

50,26±1,96

>43

Hämatokrit

[%]

12

66,2±1,3

-

Thrombozyten

[x109/EK]

12

1,66±0,77

-

Leukozyten

[x109/EK]

12

0,50±0,30

≤1,2 bei >75% d. untersuchten Proben

am Ende der Haltbarkeit (35Tage)

Hämoglobin

[g/ dl]

12

24,0±2,27

-

freies Hämogl.

[mg/ dl]

12

516±174,8

-

Hämatokrit

[%]

12

68,8±4,9

-

Hämolyserate

[%]

12

0,65±0,13

<0,8
Tabelle 2: Auswertung Human-Erythrozytenkonzentrat (buffy-coat-frei)

8,4% der gemessenen Hämatokrit-Werte liegen etwas unter der gesetzlichen Norm, alle anderen halten sie ein. Ähnlich verhält es sich bei der Leukozyten-Zahl, bei der sich 8,4% über dem Grenzwert befinden. Dieses Überschreiten liegt aber noch im Rahmen des Erlaubten.

In 25% der Fälle überschreitet die Hämolyserate den empfohlenen Wert von 0,8.

Kenngrößen

 

n

MW±SD

Richtlinien

Am Herstellungstag

Beutelvolumen

[ml]

83

261,6±27,3

-

Hämoglobin

[g/dl]

83

19,0±2,68

-

Hämoglobin

[g/EK]

83

49,7±7,01

>43

Hämatokrit

[%]

83

54,9±8,4

55-65

Thrombozyten

[x109/EK]

83

1,34±1,08

<10

Leukozyten

[x109/EK]

83

0,51±0,46

≤1,2 bei >75% d. untersuchten Proben

Basophile

[%]

71

0±0

-

Eosinophile

[%]

71

0,9±2,42

-

Stabkernige

[%]

71

0,9±2,29

-

Monozyten

[%]

71

0,14±0,85

-

Lymphozyten

[%]

71

0,01±0,12

-

Segmentkernige

[%]

71

16,2±32,3

-

am Ende der Haltbarkeit (49 Tage)

Hämoglobin

[g/dl]

12

20,1±2,6

-

freies Hämogl.

[mg/ dl]

12

271,1±113,6

-

Hämatokrit

[%]

12

62,8±7,55

-

Hämolyserate

[%]

12

0,52±0,33

<0,8
Tabelle 3: Auswertung Human-Erythrozytensuspension (buffy-coat-frei in additiver Lösung PAGGS-Mannitol)

50,6% der erzielten Hämatokrit-Werte liegen unter der erforderten Mindestmarke von 55%, 1,2% der gemessenen Leukozytenzahlen überschreiten den Normbereich. Die Hämolyse entspricht in 8,4% der Fälle nicht den Richtlinien.

Kenngrößen

 

n

MW±SD

Richtlinien

Am Herstellungstag

Beutelvolumen

[ml]

12

263,4±27,0

250±50

Hämoglobin

[g/ dl]

12

18,5±1,76

-

Hämoglobin

[g/EK]

12

48,73±4,64

>43

Hämatokrit

[%]

12

58,8±3,4

55-65

Thrombozyten

[x109/EK]

12

1,07±0,62

<10

Leukozyten

[x109/EK]

12

0,62±0,30

≤1,2 bei >75 % d. untersuchten Proben

am Ende der Haltbarkeit (49 Tage)

Hämoglobin

[g/dl]

12

19,1±2,24

-

freies Hämogl.

[mg/ dl]

12

356±199,0

-

Hämatokrit

[%]

12

64,9±4,1

-

Hämolyserate

[%]

12

0,68±0,44

<0,8
Tabelle 4: Auswertung Human-Erythrozytensuspension (buffy-coat-frei in additiver Lösung ADSOL)

Die vorgeschriebene Norm halten 91,6% der Hämatokrit-Werte ein, der Rest befindet sich darunter. Ebenso verhält es sich bei den Leukozytenzahlen, wo 8,4% etwas über der Norm liegen. Die vorgeschriebene maximale Hämolyserate halten nur 83,3% ein.

Kenngrößen

 

n

MW±SD

Richtlinien

Am Herstellungstag

Beutelvolumen

[ml]

12

265,1±21,4

-

Hämoglobin

[g/ l]

12

20,1±0,72

-

Hämoglobin

[g/EK]

12

53,3±1,91

>43

Hämatokrit

[%]

12

60,1±2,28

55-65

Thrombozyten

[x109/EK]

12

1,20±1,47

<10

Leukozyten

[x109/EK]

12

0,27±0,33

≤1,2 bei >75% d. untersuchten Proben

am Ende der Haltbarkeit (42 Tage)

Hämoglobin

[g/ dl]

12

20,0±1,3

-

freies Hämogl.

[mg/ dl]

12

223,0±71,0

-

Hämatokrit

[%]

12

65,7±3,7

-

Hämolyserate

[%]

12

0,38±0,11

<0,8
Tabelle 5: Auswertung Human-Erythrozytensuspension (buffy-coat-frei in additiver Lösung SAG-Mannitol)

8,4% der Leukozytenzahlen sind höher, als es die EU-Kommission empfiehlt.

Kenngrößen

 

n

MW±SD

Richtlinien

Am Herstellungstag

Beutelvolumen

[ml]

83

231,4±28,7

-

Hämoglobin

[g/ l]

83

18,9±1,5

-

Hämoglobin

[g/EK]

83

43,7±3,47

>40

Hämatokrit

[%]

83

54,2±4,2

-

Thrombozyten

[x109/EK]

83

0,89±0,88

-

Leukozyten

[x109/EK]

12

0,07±0,26

<5,0 bei ≥90% d.untersuchten Proben (Kammerzählverfahren)

Erythrozytenverlust

[%]

83

6,36±5,16

am Ende der Haltbarkeit (49 Tage)

Hämoglobin

[g/ dl]

12

18,8±1,54

-

freies Hämog.

[mg/ dl]

12

240,6±81,6

-

Hämatokrit

[%]

12

59,9±4,51

-

Hämolyserate

[%]

12

0,50±0,12

<0,8 untersuchten Proben
Tabelle 6: Auswertung Gefiltertes Human-Erythrozytenkonzentrat

Nach der Filterung entsprechen über 91% der Leukozytenzahlen der Norm, ebenso entspricht der Erythrozytenverlust in 85,5% der Fälle den Vorschriften.

Kenngrößen

 

N

MW±SD

Richtlinien

Nach dem Auftauen

 

 

 

 

Beutelvolumen

[ml]

12

191,4±22,3

>185

Hb-Überstand

[g/ l]

12

0,19±0,02

<0,2

Gesamt-Hb

[g]

12

35,1±3,44

≥36

Hämatokrit

[%]

12

68,4±2,58

70±5

Osmolarität

[mOsmsol]

12

328±15,9

340

Kryoprotektiv. vor Waschen

[g/ kg]

12

174,4±16,5

-

Kryoprotektiv. nach Waschen

[g/ kg]

12

2,64±0,95

-

Leukozyten

[x109/EK]

12

0,008±0,03

<0,1 bei >75% d. untersuchten Proben Proben
Tabelle 7: Auswertung Tiefkühlkonserviertes Human-Erythrozytenkonzentrat

Das Volumen der kryokonservierten EK liegt in 83,8% über dem geforderten Mindestmaß, auch befinden sich 83,8% der Hb-Überstände unter der Höchstmarke. Nur 41,6% der gemessenen Werte bei Gesamt-Hb erfüllen die gesetzlichen Vorschriften, während die Hämatokrit-Werte zu 91,6% im erforderlichen Bereich sind. Alle Proben sind steril.

Kenngrößen

 

N

MW±SD

Richtlinien

Am Herstellungstag

Beutelvolumen

[ml]

12

56,2±15,6

50-60

Thrombozyten

[x109/TK]

12

92,6±34,1

45-85

Thrombozyten-Konz

[x103/ µl]

12

1643,9±664,9

-

Leukozyten

[x109/TK]

12

0,06±0,04

0,05-1

Erythrozyten

[x109/TK]

12

0,006±0,004

0,2-1

am Ende der Haltbarkeit (5 Tage) pH-Wert

-

12

7,37±0,07

6,0-7,4
Tabelle 8: Auswertung Thrombozytenkonzentrat (aus Einzelspende)

25% der Volumina liegen unterhalb des Limits von 50ml, den vorgeschriebenen pH-Wert halten 33,3% der Proben nicht ein.

Kenngrößen

 

N

MW±SD

Richtlinien

Am Herstellungstag

Beutelvolumen

[ml]

12

250,0±0

-

Thrombozyten

[x109/TK]

12

281,5±54,6

>240

Thrombozyten-Konz.

[x103/ µl]

12

1123,7±216,5

-

Leukozyten

[x109/TK]

12

0,05±0,04

≤0,2

Erythrozyten

[x109/TK]

12

0,02±0,006

-

am Ende der Haltbarkeit (5 Tage) pH-Wert

-

12

7,1±0,14

6,0-7,4
Tabelle 9: Auswertung Thrombozytapherese

Alle Werte entsprechen den Vorschriften.

Kenngrößen

 

N

MW±SD

Richtlinien

Am Herstellungstag

Beutelvolumen

[ml]

71

297,4±26,6

-

Hämoglobin

[g/ l]

71

0,075±0,05

-

Thromboz.

[x109/l]

71

20,2±8,05

<50

Leukozyten

[x109/l]

71

0,056±0,05

<0,1

Erythrozyten

[x109/l]

71

7,0±7,0

<6,0

Nach dem Auftauen

Faktor-V-Gehalt

[%]

71

107,5±36,8

-

Faktor-VIII-Ge.

[%]

71

104,6±37,2

>70 d. Ausgangswertes

Gesamteiweiß

[%]

71

6,0±0,32

-
Tabelle 10: Auswertung Fresh Frozen Plasma

39,4% der gemessenen Erythrozytenzahlen liegen unterhalb der Höchstmarke von 6,0, die übrigen z.T. deutlich darüber.

In etwa 7 % der Fälle entspricht der Faktor-VIII-Gehalt nicht den Vorschriften.

Funktionelle Parameter

Abb. 1: Der Hämatokrit der Erythrozytenkonzentrate, gemessen mit dem Sysmex von Digitana, erhöht sich um 5,7%. Diese Änderung ist signifikant mit p<0,05. Die Veränderung des Hämatokrits gemessen mit einer Mikrohämatokrit-Zentrifuge ist weit weniger deutlich, nämlich nur um 0,63%. Diese Erhöhung ist nicht signifikant.

Abb. 2: Die Plasmaviskositätssteigerung um 3,45% ist nicht signifikant. Die Zunahme der Viskosität der Erythrozytenkonzentrate von 5,18 auf 7,25 mPa.s ist signifikant (p<0,05) und entspricht einer Erniedrigung der Fließfähigkeit von fast 40%.

Abb. 3: Das mittlere Zellvolumen MCV verändert sich um 5,3%. Diese Zunahme ist aber dennoch signifikant (p<0,05).

Abb. 4: Die Erythrozytenrigidität SER nimmt innerhalb von vier Wochen Lagerungszeit um 56,3% zu, diese Änderung ist signifikant (p<0,05).

Die Zahl der Leukozyten sinkt signifikant (p<0,05). Es wird eine Abnahme von 33,6% ermittelt.

Die Zahl der Thrombozyten steigt signifikant um 207%. Dabei ist zu beachten, daß durch den elektronischen Zellzähler Sysmex auch Bruchstücke als Thrombozyten gezählt werden.

Die Änderung der Erythrozytenzahl um nur 0,3% ist nicht signifikant.

Eine tabellarische Übersicht über die Ergebnisse der rheologischen Untersuchungen befindet sich im Anhang (Punkt X).