3. Material

3.1  Chemikalien und Lösungen

↓40

Aceton (CH3)2CO)

J.T. Baker, Deventer, NL

 

Acrylamid 30% (29:1 Solution)

Bio-Rad Laboratories, München, D

Agarose

Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland

Ampli-Taq DNA-Polymerase

Eurogentec, Berlin, D

Ammoniumpersulfat (APS)

Bio-Rad Laboratories, München, D

Aqua ad injectabilia

Braun, Melsungen, D

Aquatex

Merck, Darmstadt, D

Benzamidin

Sigma, Steinheim, D

Bovine serum albumine (BSA)

FLUKA Biochemika, Steinheim, D

3-3 Cholamidopropyldimethylammonio-1- propanesulfonate (CHAPS)

FLUKA Biochemika, Steinheim, D

Cobalt- Prothoporphyrin

Sigma, Steinheim, D

Desoxyribobukleotidtriphosphate (dNTPs)

Promega, Mannheim, D

Di-Natriumhydrogenphosphat-Heptahydrat

(Na2HPO4 x 7H2O)

Merck, Darmstadt, D

1,4-Dithio-DL-Threitol (DDT)

FLUKA Biochemika, Steinheim, D

E-Aminokapron-Säure

Bachem Holding AG, Weil am Rhein, D

ECLTM Western Blotting Analysis System (Kit)

Amersham Biosciences, Freiburg, D

EDTA, Ethylendiamintetraacetat (EDTA)

Sigma, Taufkirchen, D

Ethanol 100 Vol%

Herbeta – Arzneimittel, Berlin, D

FCS, Fetal calf serum, Kälberserum

Biochrom AG, Berlin, D

FicoLite-M

Linaris, Bettingen am Main, D

1 mM Fluorescein

Fermentas, St.Leon-Rot, D

Glycerin

Sigma, Steinheim, D

Glycin

Calbiochem, Darmstadt, D

Hämalaun

Merck, Darmstadt, D

10x Hank’s Balance Salt Solution (HBSS)

Gibco, Invitrogen, Karlsruhe, D

4-2-Hydroxyethylpiperazine-1-ethanesufonic acid (HEPES)

FLUKA Biochemika, Steinheim, D

Isopropanol

FLUKA Biochemika, Steinheim, D

Kaliumchlorid (KCl)

Merck, Darmstadt, D

Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4)

Merck, Darmstadt, D

Kaliumhydrogencarbonat (KHCO3)

Merck, Darmstadt, D

Methanol

Merck, Darmstadt, D

Ammoniumchlorid (NH4Cl)

Merck, Darmstadt, D

Natriumchlorid (NaCl)

Merck, Darmstadt, D

Natriumhydrogencarbonat (NaHCO3)

Merck, Darmstadt, D

Natriumdihydrogenphosphat (NaH2PO4)

Merck, Darmstadt, D

Natirumazid (NaN3)

Merck, Darmstadt, D

N,N,N’,N’-Tetra-methyl-ethylendiamin (TEMED)

Bio-Rad Laboratories, München, D

Oligo-Desoxynukleotide

Metabion, Martinsried, D

Oligo dThymidin-Nukleotide (odT´s)

Amersham Biosciences, Freiburg, D

PBS, phosphate buffered saline

DULBECCO´S, PAA Laboratories GmbH, D

Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)

Merck, Darmstadt, D

Phorbol-12,13-myristylacetat (PMA)

Sigma, Steinheim, D

Ponceau-Rot

Sigma, Steinheim, D

RPMI 1640

Gibco, Invitrogen, Karlsruhe, D

ProSieve®, Color Protein Markers

Cambrex Bio Science Rockland Inc., Rockland, Maine, USA

Roti®-HistoKit

Roth, Karlsruhe, D

Saponin

Riedel-de Haen, Seelze, D

Skim Milk Powder (Milchpulver)

FULKA Biochemika, Steinheim, D

Sodium-dodecyl-sulfate (SDS)

Sigma, Steinheim, D

Tissue Freezing Medium®

Leica, Nussloch, D

Tris(hydroxymethyl)aminomethan (Tris)

Merck, Darmstadt, D

Triton X 100

Sigma, Steinheim, D

Trizma® Hydrochlorid (Tris/HCl)

Sigma, Steinheim, D

TRIzol®

Invitrogen, Karlsruhe, D

Trypanblau

Biochrom AG, Berlin, D

Tween 20

Merck-Schuchardt, Hohenbrunn, D

Wasserstoffperoxid (H2O2)

Merck, Darmstadt, D

Xylol

J.T.Baker, Deventer, NL

Zink-Prothoporphyrin IX

Frontier-Scientific, Lancashire, UK

3.2 Angesetzte Lösungen

Coomassie-Farbelösung

10% Essigsäure

20% Ethanol

0,1 % Coomassie R250

in Aqua dest.

Coomassie-Entfärbelösung

10% Essigsäure

20% Ethanol

in Aqua dest.

Caspase-3 Lysis-buffer

200 mM HEPES pH 7,4

1% CHAPS

50 mM DTT

20 mM EDTA

ad 1L Aqua dest.

FACS-Puffer

PBS + 1% BSA + 0,1% NaN3 

FCS-RPMI-Medium

RPMI 1640 + 10% FCS + Pen/Strep

FACS Lysis-Puffer

1,5 M NH4Cl

10 mM KHCO3

100 mM EDTA

ad 1L Aqua dest.

PBS

136 mM NaCl

2,7 mM KCl

17,2 mM Na2HPO4 x 7 H2O

1,8 mM KH 2 PO 4

ad 1L Aqua dest.

2x Probenpuffer (Western Blot)

62,5 mM Tris HCl, pH8,8

8% β-Mercaptoethanol

3% SDS

20% Glycerin

0,02% Bromphenolblau

in Aqua dest.

Protein Lysis-Puffer

100 ml PBS + 0,1% Triton X 100 +

Proteinaseinhibitoren

2 ml Proteaseinhibitoren

1 ml Stammlösung A + 1 ml Stammlösung B

Stammlösung A

100 mM PMSF in Isopropanol

100 mM Benzamidin

Stammlösung B

100 mM E-Aminocapron-Säure

100 mM EDTA

in Aqua dest

Saponinlösung

PBS + 0,1% Saponin

Sammelgel (4%)

Acrylamid

ddH2O

Tris-HCl pH 6,8

TEMED

SDS 10%

5 x SDS-Laufpuffer

Tris HCl

Glycin

SDS

in Aqua dest.

Trenngel (7%)

4,7 ml Acrylamid

10 ml ddH2O

5 ml Tris-HCl pH 8,8

14µl TEMED

200µl SDS 10%

Trenngel (12%)

Acrylamid

ddH2O

Tris-HCl pH 8,8

TEMED

SDS 10%

Tris buffered saline (TBS) für IHC

74 mM Tris

43 mM Tris/HCl

150 mM NaCl

ad 1L Aqua dest. (pH 7,6)

Tris buffered saline (TBS) für Western Blott

74 mM Tris

150 mM NaCl

ad 1L Aqua dest. (pH 7,6)

3.3 Enzyme, Antikörper und andere biologisch aktive Substanzen

AB Complex/ HRP-Kit

Dako-Cytomation, Glostrup, DK

AEC-Substrate + Chromogen

Dako-Cytomation, Glostrup, DK

Avidin-Biotin-Blocking Kit

Vector Laboratories, Inc. Burlingame, CDN

Beta-actin-AK

Abcam, Cambridgeshire, UK

Bio-Rad Protein Assay

Bio-Rad, München, D

1,5 mg/ml biotinylated anti-rabbit IgG (H+L)

Vector Laboratories, Inc. Burlingame, CDN Lot.: 00013145

Caspase-3 colorimetric assay

Sigma, Steinheim, D

CD3-AK: purified anti-mouse CD3

BD Biosciences Pharmingen, Heidelberg, D

CD4-AK: purified anti-mouse CD4

BD Biosciences Pharmingen, Heidelberg, D Kat.Nr.: 557307

CD8-AK: purified anti-mouse CD8

BD Biosciences Pharmingen, Heidelberg, D Kat.Nr.: 553034

CD25-AK: purified anti-mouse CD25

BD Biosciences Pharmingen, Heidelberg, D Kat.Nr.: 553866

DNAse (2u/µl)

Stratagene, Amsterdam, N

IL-4 AK: PE-rat anti mouse IL-4

BD Biosciences Pharmingen, Heidelberg, D Kat.Nr.: 554435

IL-10 AK: PE-rat anti mouse IL-10

BD Biosciences Pharmingen, Heidelberg, D Kat.Nr.: 554467

IFN-γ AK: PE anti mouse IFN- γ

BD Biosciences Pharmingen, Heidelberg, D Kat.Nr.: 554412

Ionomycin

Sigma, Taufkirchen, D

in situ Cell Death Detection Kit, POD

Roche, Mannheim, D

M-MLV RT 5x Reaktions Puffer

Promega, Mannheim, D

M-MLV Reverse Transkriptase (200u/µl)

Promega, Mannheim, D

Monensin

Sigma, Taufkirchen, D

Penicillin/Streptomycin

Gibco, Karlsruhe, D

Polyclonal rabbit anti HO-1

Alexis Biochemicals, Grünberg, D
Lot.: L13995/a

Polyclonal rabbit anti HO-2

Stress-Gen, Victoria, CDN
Lot.: 909412

Polyclonal rabbit anti eNOS

Santa Cruz, Heidelberg, D
Lot.: I2402

Polyclonal rabbit anti iNOS

Santa Cruz, Heidelberg, D
Lot.: H272

Primer (TNF-α, HO-1, TGF-β, β-actin)

Metabion, Martinsried, D

rmIL12

RD-Systems, Wiesbaden-Nordenstadt, D Lot. BB125021

rmIL2

RD-Systems, Wiesbaden-Nordenstadt, D Lot.: MX124111

RNAse Inhibitor (40u/µl)

Promega, Mannheim, D

Sonde (TNF-α, HO-1, TGF-β, β-actin)

Eurogentec, Seraing, B

SYBR® Green PCR Master Mix

Stratagene, Amsterdam, NL

TaqMan-Mastermix (2x Reaktionpuffer)

Eurogentec, Seraing, B

TNF-α AK: PE labelled anti mouse TNF-α

BD Biosciences Pharmingen, Heidelberg, D Kat.Nr.: 554419

3.4 Gebrauchswaren

↓41

Aluminium-Folie

Gordopack GmbH, Lindlar, D

Deckgläser (24 x 46 mm)

Paul-Marienfeld, Lauda-Königshofen, D

Einwegspritzen 1ml

BD Biosciences Pharmingen, Heidelberg, D

Fettstift (ImmEdgeTM Pen)

Vector Laboratories, Inc. Burlingame, CDN

Filterspitzen (10/100/1000µl)

Greiner bio-one, Kremsmünster, A

Fotopapier (Biomax MR Film)

Kodak, Stuttgart, D

Objekträger (76 x 76 mm)

R.Langenbrinck, Teningen, D

Pasteurpipetten (Plastik)

Eppendorf, Hamburg, D

5/10/15ml Pipettenspitzen

BD Biosciences, Heidelberg, D

0.5/1,5/2 ml Reaktionsgefäße

Eppendorf, Hamburg, D

1,5ml Reaktionsgefäße RNAse frei

Abgene, Hamburg, D

15 und 50ml Reaktionsgefäße

BD Pharmingen, Heidelberg, D

10/100/1000 µl Spitzen

Eppendorf, Hamburg, D

8 Cap Strips, Ultra clear

Abgene, Hamburg, D

6/12/96-Well Zellkulturplatten

Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ, USA

Zellkulturflaschen 75cm²

Becton Dickinson, Lefont de Claix, F

Zellsiebe 100µm

BD Biosciences, Heidelberg, D

Thermo-Fast®96 Non Skirted

Abgene, Hamburg, D

3.5 Laborgeräte

ABI Prism® 7700 Sequence Detector

Applied Biosciences, Lincoln, USA

Agarose Gelkammer / Netzteil

Amersham Bioscience, Freiburg, D

Aglient 8453 Spectrophotometer

American Laboratory Trading, Groton, USA

Arbeitsbank, steril (Lamin Air)

Heraeus Instruments, Hanau, Deutschland

Blutdruckmessgerät

TSE-Systems, Bad Homburg, D

Brutschrank

Heraeus Instruments, Hanau, Deutschland

Cell Quest Programm

Becton Dickinson, San Jose, USA

Compact2 Röntgenfilmentwicklungsmaschine

PROTEC Medizintechnik GmbH, Oberstenfeld, D

Electrophoresis Power Supply-ESP 3051 XL

Amersham Bioscience, Freiburg, D

FACS-Calibur

Becton Dickinson, San Jose, USA

Geldokumentation

Bio-Rad, München, D

Handhomogenisator

Wheaton, Milleville NJ, USA

Homogenisator Ultra Turrax T8

IKA Labortechnik, Staufen, Deutschland

Hypercasette

Amersham Bioscience, Little Chalfont, UK

iCycler iQ Real-Time PCR Detection System

Bio-Rad, München, D

Imagequant TL Program

Amersham Bioscience, Freiburg, D

Kühltruhen

-80°C

New Brunswick Scientific Co., Edison NJ, USA

-20°C

Sanyo Electric, Osaka, J

Kühlschrank FKS 3600

Liebherr, Ochsenhausen, D

Laborwaage LA620P

Sartorius, Göttingen, D

Laborzentrifuge 3K15

Sigma, Steinheim, D

Laborzentrifuge Rotixa/RP

Hettich, Tuttlingen, D

Microm Cyro Console

Microm, Heidelberg, D

Microm Dispensing Console

Microm, Heidelberg, D

Microm Thermal Console

Microm, Heidelberg, D

Microtom HM400

Microm, Heidelberg, D

Mikroskop Olympus BX40

Olympus, Hamburg, D

Mini Protean 3

Bio-Rad, München, D

Mastercyler Personal

Eppendorf, Hamburg,

Neubauer-improved Zählkammer

Migge, Heidelberg, D

Kolbenhubpipetten

Eppendorf, Hamburg, D

Rotlichtlampe HP1511

Philips, Hamburg, D

Thermomixer comfort

Eppendorf, Hamburg, D

UV-Mikroküvetten

Brand, Wertheim, Deutschland

Wannenbad Julabo SW20

Julabo Labortechnik, Seelbach

3.6 Tiere und Tierzubehöhr

BALB/c ♀

Harlan Winkelmann, Borchen, D

BALB/c ♂

Harlan Winkelmann, Borchen, D

CBA/J ♀

Charles River, Les Oncins, F

DBA/2J ♂

Charles River, Wilmington/MA, USA

C57/BL6 ♂

BgVV, Berlin, D

Typ 2-PC Käfig

Ebeco, Castrop-Rauxel, D

Typ 3 Deckel mit  Fallbügel  DST 2 

Ebeco, Castrop-Rauxel, D

Flaschen mit  Silikondichtungsring (F 30)

Ebeco, Castrop-Rauxel, D

Streu FS-14

Ssniff, Soest, D

Extrodiertes Futter

Ssniff, Soest, D


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06.02.2008