Bei sämtlichen verwendeten Zelllinien handelte es sich um Epstein-Barr-Virus (EBV)-transformierte B-Lymphozyten (lymphoblastoide Zellen).

NBS-Zelllinien

Ort der Transformation

JaCe

Institut für Humangenetik, Universität Würzburg

PeAb

Institut für Humangenetik, Universität Würzburg

RoZd

Institut für Humangenetik, Universität Würzburg

94P247

Institut für Humangenetik, Charité Universitätsmedizin Berlin

94P307

Institut für Humangenetik, Charité Universitätsmedizin Berlin

95P185

Institut für Humangenetik, Charité Universitätsmedizin Berlin

96P0048

Institut für Humangenetik, Charité Universitätsmedizin Berlin

AT-Zelllinien

AT15

Institut für Humangenetik, Charité Universitätsmedizin Berlin

L15

Department of Human Genetics, Sackler Faculty of Medicine, Tel Aviv/Israel

Kontrollzelllinien

95P466

Institut für Humangenetik, Charité Universitätsmedizin Berlin

98P651

Institut für Humangenetik, Charité Universitätsmedizin Berlin

C520

Institut für Humangenetik, Charité Universitätsmedizin Berlin

Medium

Hersteller

Fetales Kälberserum

Gibco BRL GmbH,

Penicillin/Streptomycin

PAA Laboratories GmbH, Linz, Österreich

RPMI

PAA Laboratories GmbH, Linz, Österreich

Substanz

Hersteller

Agarose

Gibco BRL GmbH, Eggenstein

Big Dye Terminator Mix

Applied Biosystems GmbH, Weiterstadt

Bleomycin

Mack Medizintechnik GmbH, Pfaffenhofen

Cyclophosphamid

Baxter Oncology GmbH, Frankfurt

DMSO

Sigma Aldrich Chemie GmbH, Deisenhofen

dNTPs

Rapidozym, Berlin

Einbettmedium

Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA

Ethanol

Merck, Darmstadt

Ethidiumbromid

Serva, Heidelberg

Methotrexat

Medac GmbH, Wedel

Natriumcitratdihydrat

Merck, Darmstadt

Paraformaldehyd

ICN Biomedicals, Aurora, OH, USA

PBS-Tabletten

ICN Biomedicals, Aurora, OH, USA

Rinderserumalbumin

Sigma Aldrich Chemie GmbH, Deisenhofen

Saccharose

Roth, Karlsruhe

SDS

Sigma Aldrich Chemie GmbH, Deisenhofen

Tris

Merck, Darmstadt

Enzym

Hersteller

DNAse I

Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim

DNA-Polymerase I

Gibco BRL GmbH, Eggenstein

Proteinase K

Boehringer Mannheim GmbH, Mannheim

Taq-DNA-Polymerase

Gibco BRL GmbH, Eggenstein

Lösung/Puffer

Zusammensetzung bzw. Hersteller

Einfriermedium

90% RPMI (15% FKS, Pen/Strep), 10% DMSO

Facs Flow/Safe/Rinse

Becton Dickinson, San Jose, CA, USA

Fixierungslösung

25% Essigsäure, 75% Ethanol

Giemsa-Färbelösung

5%ig: 5 ml Giemsa, 10 ml 10xGiemsa-Puffer, 85 ml H₂O

Isoton-Lösung (Zellzahlbestimmung)

Beckman Coulter GmbH, Krefeld

Ladepuffer A

20% Ficoll 400, 5 mM EDTA, autokl., 0,05% Bromphenolblau

Lysepuffer

1xPCR-Puffer, 1,7 µM SDS, 50 µg/ml Proteinase K

Nicoletti-Puffer

1 M Natriumcitratdihydrat, 0,1% Triton x-100, 50 µg/ml Propidiumiodid

PBS

0,14 M NaCl, 2,7 mM KCl, 6,5 mM Na₂HPO₄

10xPCR-Puffer I

100 mM Tris-HCl (pH 8,5), 500 mM KCl, 30 mM MgCl₂ (Mycoplasmentest Minerva)

TBE-Puffer (10x) (Laufpuffer)

900 mM Tris, 900 mM Borsäure, 40 mM EDTA

TE-Puffer

10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 1 mM EDTA

Triton X-100

Calbiochem, La Jolla, CA, USA

Gerät

Hersteller

ABI Sequencer 3100

Applied Biosystems GmbH, Weiterstadt

Automatische Pipettierhilfe

Integra Biosciences GmbH, Fernwald

Brutschrank

Heraeus Holding GmbH, Hanau

Dispensette

Brand GmbH, Wertheim

FACS Calibur

Becton Dickinson, San Jose, CA, USA

FACS Scan

Becton Dickinson, San Jose, CA, USA

Feinwaage BP3100S

Sartorius AG, Göttingen

Fluoreszensmikroskop

Zeiss Axiophot, Oberkochen

Geldokumentation

Herolab, Wiesloch

Gelelektrophoresekammer

Renner GmbH, Dannstadt

Invertmikroskop Telaval 31

Zeiss, Oberkochen

Mikroliterpipetten

Eppendorf GmbH, Hamburg

N₂-Tank

Messer Griesheim GmbH, Krefeld

Partikelzähler

Beckman Coulter GmbH, Krefeld

Schüttelinkubator Thermomixer 5436

Eppendorf GmbH, Hamburg

Spannungsgeräte (Elektrophorese)

Pharmacia Biotech, San Francisco, CA, USA

Sterilbank Laminair HBB2448

Heraeus Holding GmbH, Hanau

Thermocycler

Biometra, Göttingen

Wasserbad

GFL, Burgwedel

Zentrifugen

Heraeus, Eppendorf

Kit

Hersteller

Annexin-V Apoptosis Detection Kit

BD Biosciences, San Jose, CA, USA

Dye Ex Spin Kit

Qiagen, Hilden

In Situ Cell Death Detection Kit, Fluorescein

Roche Diagnostics GmbH, Mannheim

Montage PCR (Reinigungskit)

Millipore Corp., Bedford, MA, USA

Venor GeM®-Mycoplasma Detection Kit

Minerva Biolabs GmbH, Berlin

Material

Hersteller

Blue-Caps (15/50 ml)

Falcon, Heidelberg

Eppendorfgefäße (1,5 ml)

Sarstedt, Nümbrecht

FACS-Röhrchen (5 ml)

Falcon, Heidelberg

Gewebezuchtflaschen (50/275 ml)

Falcon, Heidelberg

Kryoröhrchen

Greiner Labortechnik, Frickenhausen

Multiwell-Platten (6er/24er)

Falcon, Heidelberg

Pipettenspitzen

Sarstedt, Nümbrecht

PS-Röhrchen (14 ml)

Falcon, Heidelberg

Sterilpipetten (5/10/25 ml)

Falcon, Heidelberg

Transferpipetten, 2,5 ml steril/unsteril

Sarstedt, Nümbrecht

Anwendung

Hersteller

CellQuest Software, V. 4.0.2

BD Biosciences, San Jose, CA, USA

WinMdi, V. 2.8

J. Trotter, La Jolla, CA, USA

Sigma Plot, V. 8.0

SPSS Science, Chicago, IL, USA

Microsoft Excel 97

Microsoft Corp., Seattle, WA, USA

Als DNA-Längenvergleichsstandard wurde der Marker pSP65/Hinf I (AG Digweed) eingesetzt. Für molekularbiologische Arbeiten wurde deionisiertes Wasser aus einer Aufbereitungsanlage (MilliQ UFplus) der Firma Millipore Corp. (Bedford, MA, USA), mit einer Leitfähigkeit von 5 –15 mΩ/cm verwendet.