| Jens Zimmer: Zur Populations- und Aktivitätsdynamik des nützlichen Rhizobakteriums
Bacillus
subtilis
(Ehrenberg) Cohn nach Introduktion in natürliche Systeme von Pflanze und Boden |
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Humboldt-Universität zu Berlin
Zur Populations- und Aktivitätsdynamik des nützlichen Rhizobakteriums
Bacillus
subtilis
(Ehrenberg) Cohn nach Introduktion in natürliche Systeme von Pflanze und Boden
DISSERTATION
zur Erlangung des akademischen Grades
Doctor rerum horticulturarum
(Dr. rer. hort.)
eingereicht an der
Landwirtschaftlich-Gärtnerischen Fakultät
der Humboldt-Universität zu Berlin
von
Diplom-Gartenbauingenieur
Jens
Zimmer
geb. am 24.02.1968 in Großröhrsdorf (Sa.)
Dekan: Dekan der Landwirtschaftlich-Gärtnerischen Fakultät
Prof. Dr. Uwe Jens Nagel
Gutachter:
1. Prof. em. Dr. Dr. h.c. H. Bochow
2. Dr. K.-D. Hentschel
3. Prof. Dr. U. Burth
eingereicht: Juni 2003
Datum der Promotion: 05.12.2003
Kurzfassung
Zimmer, Jens: Zur Populations- und Aktivitätsdynamik des nützlichen Rhizobakteriums
Bacillus
subtilis
(Ehrenberg) Cohn nach Introduktion in natürliche Systeme von Pflanze und Boden
Die Besiedlung der Pflanzenwurzel und das Vorhandensein aktiver Zellen sind grundlegende Voraussetzungen für das Zustandekommen phytoeffektiver und Pathogen unterdrückender Effekte durch Applikation des Nutzbakteriums Bacillus
subtilis. Der Einfluss ökologischer und edaphischer Faktoren auf das Besiedlungsverhalten der introduzierten Bakterien wurde im Rahmen umfangreicher populations- und aktivitätsdynamischer Untersuchungen ergründet. Die Versuche wurden in drei verschiedenen Substrattypen an der Modellpflanze Erbse (Pisum
sativum L. cv. ‘Bördi‘) unter kontrollierten Bedingungen in der Klimakammer durchgeführt.
Die Populationsdichte von Bacillus
subtilis war in starkem Maße abhängig von der angewendeten Dosis. Die Verwendung von Kaliumnitrat, Sand oder Maisstärke als Trägerstoff für die Bacillus
subtilis-Formulierung war für das Besiedlungsverhalten des Nutzbakteriums unerheblich.
Die Entwicklung von Bacillus
subtilis-Populationen an Pflanzenwurzel und im Substrat war temperaturabhängig. Höhere Versuchstemperaturen hatten größere Populationsdichten zur Folge. Der Temperatureinfluss war in Quarzsand wesentlich stärker als in Feldboden. Die peripheren Wurzelteile wiesen in Quarzsand zumeist größere Populationsdichten auf als die in Samennähe befindlichen Wurzelteile. Der Zusatz des Neem-Präparates Rhakshak Gold führte in vivo weder zu einer signifikanten Erhöhung der Populationsdichte von Bacillus
subtilis noch zu einer Aktivitätserhöhung. Die Gesamtkeimzahlen in Rhizosphäre und Substrat wurden durch die Anwendung von Bacillus
subtilis nicht beeinflusst.
Die Aktivität von Bacillus
subtilis in Rhizosphäre, Rhizoplane und Substrat war gering, der größte Teil der Keime lag versport vor. Die geringsten Versporungsgrade wurden in Quarzsand in der Rhizoplane sowie in Feldboden im Substrat festgestellt.
Die Applikation des Nutzbakteriums führte zu einem reduzierten Krankheitsbefall der Erbsenpflanzen mit Phoma
pinodella und Rhizoctonia
solani. Die antifungale Wirkung kam in Feldboden und Aussaaterde wesentlich stärker zum Tragen als in Quarzsand.
Es war kein direkter Zusammenhang zwischen Populationsdichte der introduzierten Bakterien in Rhizosphäre und Substrat und deren phytoeffektiver sowie antifungaler Leistung erkennbar. Als Ursache dafür wird der hohe Anteil versporter Zellen in der Bacillus
subtilis-Population angesehen.
Die Ergebnisse werden hinsichtlich der Bedeutung des Besiedlungsverhaltens und der Aktivität von Bacillus
subtilis für dessen phytoeffektive und antifungale Wirkung diskutiert.
Eigene Schlagworte:
Bacillus
subtilis
,
Populationsdynamik,
Aktivitätsdynamik,
Biologischer Pflanzenschutz,
ökologische Faktoren,
Erbse
Abstract
Zimmer, Jens: Population- and activity dynamics of the beneficial rhizobacterium
Bacillus
subtilis
(Ehrenberg) Cohn after introduction into natural systems of plant and soil
The colonization of the plant root and the presence of physiologically active bacterial cells are basic conditions to obtain plant growth promotion and disease suppression by application of Bacillus
subtilis. Studies of the population- and activity dynamics of the introduced bacteria were carried out to determine the influence of different soil types and ecological factors on colonization of plant roots by Bacillus
subtilis. Pea plants (Pisum
sativum L. cv. ‘Boerdi‘) which were treated with these bacteria have been grown in three different types of substrate under controlled conditions in the climate chamber.
The population density of Bacillus
subtilis was strongly dependend on the applied number of cfu (colony forming units). The use of potassium nitrate, sand or maize starche as carrier for the bacterial formulation did not affect the colonization behaviour.
The development of Bacillus
subtilis-populations at the plant roots and in the substrate was significantly influenced by temperature. Higher temperatures during the trials resulted in larger population sizes of the introduced bacteria. The influence of temperature was much stronger in quartz sand compared with field soil. In most cases the colonization of the outer parts of the root near the root tip was better than the colonization of the root parts near the seed. The addition of the neem-extract Rakshak Gold did not have a significant influence on population density and activity of Bacillus
subtilis
in vivo. Nearly no effects of the bacterial treatments on the indigenous microflora could be found.
The physiological activity of Bacillus
subtilis in the rhizosphere, on the root surface and in the substrate was low. The bacterial population consisted largely of spores. The lowest percentage of spores was determined directly on the root surface (in quartz sand) and in the substrate (in field soil) respectively.
The bacterial treatments led to a reduced disease severity on pea plants caused by Phoma
pinodella and Rhizoctonia
solani. The antifungal activity was higher in field soil and horticultural substrate compared with quartz sand.
There was no correlation between the population density of the introduced bacteria in rhizosphere and substrate and their plant growth promoting or antifungal effects. A possible reason for that is the high percentage of non-active cells within the population of Bacillus
subtilis.
The results would be discussed towards the importance of population dynamics and activity of the rhizobacterium Bacillus
subtilis for its plant growth and health promoting effects.
Eigene Schlagworte:
Bacillus
subtilis
,
population dynamics,
activity dynamics,
biological control,
ecological factors,
pea
Gewidmet
meinem viel zu früh verstorbenen Vater, Herrn Dipl.-Ing.
Egon Zimmer (19.05.1942 – 22.11.2001)
Inhaltsverzeichnis
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1.
Einleitung
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2.
Das Besiedlungsverhalten von Bacillus subtilis und anderer Rhizosphärebakterien
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2.1. Räumliche und zeitliche Verteilung
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2.2. Einflussfaktoren
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2.2.1. Allgemein
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2.2.2. Temperatur
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2.2.3.
Physiko-chemische Bodeneigenschaften und mikrobielle Konkurrenz
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2.2.4. Eigenschaften der Interaktionspartner
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2.3. Zusammenhang zwischen Populationsdichte und Wirksamkeit
-
3.
Material und Methoden
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3.1. Charakterisierung der Versuchsorganismen
-
3.1.1. Testpflanze Erbse (Pisum sativum L.)
-
3.1.2. Wurzelfäuleerreger Phoma pinodella (L.K.Jones) Morgan-Jones & Burch
-
3.1.3. Wurzelfäuleerreger Rhizoctonia solani Kühn
-
3.1.4. Nutzbakterium Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn
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3.2. Charakterisierung der verwendeten Substrate
-
3.3. Versuchsdesign
-
3.3.1. Versuchsserie 1
-
3.3.2. Versuchsserie 2
-
3.3.3. Versuchsserie 3
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3.3.4. Langzeitversuch
-
3.3.5. Einzelversuche zur Populations- und Aktivitätsdynamik von
Bacillus
subtilis
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3.3.6. Komplexversuche
-
3.4. Versuchsauswertung
-
3.4.1. Erfassung von Wachstumsparametern der Testpflanzen
-
3.4.2.
Ermittlung des Krankheitsbefalls der Testpflanzen
-
3.4.3. Reisolation der introduzierten
Bacillus
subtilis
-Isolate
-
3.4.4.
Statistische Auswertung
-
4.
Ergebnisse
-
4.1. Versuchsserie 1
-
4.1.1. Besiedlungsverhalten von
Bacillus
subtilis
-
4.1.2. Einfluss der
Bacillus
subtilis
-Behandlungen auf das Pflanzenwachstum
-
4.2. Versuchsserie 2
-
4.2.1. Besiedlungsverhalten von
Bacillus
subtilis
-
4.2.2.
Einfluss der
Bacillus
subtilis
-Behandlungen auf das Pflanzenwachstum
-
4.2.3.
Einfluss der
Bacillus
subtilis
-Behandlungen auf den Krankheitsbefall der Testpflanzen
-
4.3. Versuchsserie 3
-
4.3.1. Besiedlungsverhalten von
Bacillus subtilis
-
4.3.2.
Einfluss der
Bacillus
subtilis
-Behandlungen auf das Pflanzenwachstum
-
4.3.3. Einfluss der
Bacillus
subtilis
-Behandlungen auf den Krankheitsbefall der Testpflanzen
-
4.4. Langzeitversuch
-
4.4.1. Besiedlungsverhalten von
Bacillus subtilis
-
4.4.2.
Einfluss der
Bacillus
subtilis
-Behandlungen auf das Pflanzenwachstum
-
4.4.3. Einfluss der
Bacillus
subtilis
-Behandlungen auf den Krankheitsbefall der Testpflanzen
-
4.5. Einzelversuche zur Untersuchung von Populations- und Aktivitätsdynamik von Bacillus
subtilis
-
4.6. Komplexversuche
-
4.6.1. Besiedlungsverhalten von
Bacillus
subtilis
-
4.6.2. Aktivität von
Bacillus
subtilis
-
4.6.3. Einfluss der Behandlungen auf das Pflanzenwachstum
-
4.6.4. Einfluss der Behandlungen auf den Krankheitsbefall der Testpflanzen
-
5.
Diskussion
-
6.
Schlussfolgerungen
-
7.
Zusammenfassung
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verwendete Abkürzungen
-
Literaturverzeichnis
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Anhang
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Danksagung
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Eidesstattliche Erklärung
Tabellen
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Tab.1:Nährstoffgehalte des in den Versuchen verwendeten Feldbodens
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Tab.2:Wichtige Eigenschaften von Floragard Aussaaterde (Herstellerangaben)
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Tab.3:Varianten von Versuchsserie 1
-
Tab.4:Varianten des Langzeitversuchs
-
Tab.5:Varianten der Komplexversuche
-
Tab.6:Populationsdichte von Bacillus subtilis (FZB24®
und FZB27) in Quarzsand nach 30 Tagen [log cfu / g Trockenmasse]S = SaatgutbehandlungS+B = Saatgut- und Substratbehandlung
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Tab.7:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer bei 10 °CFM = FrischmasseTM = TrockenmasseS = SaatgutbehandlungS+B = Saatgut- und Substratbehandlung
-
Tab.8:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer bei 15 °CFM = FrischmasseTM = TrockenmasseS = SaatgutbehandlungS+B = Saatgut- und Substratbehandlung
-
Tab.9:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer bei 20 °CFM = FrischmasseTM = TrockenmasseS = SaatgutbehandlungS+B = Saatgut- und Substratbehandlung
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Tab.10:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer bei 25 °CFM = FrischmasseTM = TrockenmasseS = SaatgutbehandlungS+B = Saatgut- und Substratbehandlung
-
Tab.11:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer [% zur Kontrolle]FM = FrischmasseTM = TrockenmasseS = SaatgutbehandlungS+B = Saatgut- und Substratbehandlung
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Tab.12:Einfluss verschiedener Trägerstoffe auf die Populationsdichte von Bacillus
subtilis FZB47 in Quarzsand nach 30 Tagen [log cfu / g]S = SaatgutbehandlungS+B = Saatgut- und Substratbehandlung
-
Tab.13: Einfluss verschiedener Trägerstoffe auf die Populationsdichte von Bacillus
subtilis FZB27 in Quarzsand nach 30 Tagen [log cfu / g]S = SaatgutbehandlungS+B = Saatgut- und Substratbehandlung
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Tab.14:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach Inokulation mit Phoma pinodella bei 15 °CFM = Frischmasse, TM = TrockenmasseS = Saatgutbehandlung, S+B = Saatgut- und Substratbehandlung
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Tab.16:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach Inokulation mit Phoma pinodella bei 25 °CFM = Frischmasse, TM = TrockenmasseS = Saatgutbehandlung, S+B = Saatgut- und Substratbehandlung
-
Tab.17:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach Inokulation mit Phoma pinodella [% zur inokulierten Kontrolle]FM = Frischmasse, TM = TrockenmasseS = Saatgutbehandlung, S+B = Saatgut- und Substratbehandlung
-
Tab.18: Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf den Krankheitsbefall von Erbsenpflanzen nach Inokulation mit Phoma pinodella [Krankheitsindex in %, Spalte Gesamt: Krankheitsbefall in % zur inokulierten Kontrolle]Signifikante Unterschiede gegenüber der inokulierten Kontrolle sind bei den drei Temperaturstufen mit „*“ gekennzeichnet (nach Kruskal-Wallis-H-Test).
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Tab.19:Populationsdichte von Bacillus
subtilis FZB47 in Feldboden nach 30 Tagen [log cfu / g]S = Saatgutbehandlung, S+B = Saatgut- und SubstratbehandlungP = mit Pathogen-Inokulation
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Tab.20:Populationsdichte von Bacillus
subtilis FZB27 in Feldboden nach 30 Tagen [log cfu / g]S = Saatgutbehandlung, S+B = Saatgut- und SubstratbehandlungP = mit Pathogen-Inokulation
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Tab.21:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen in Feldboden ohne und mit Inokulation durch Phoma pinodella bei 15 °CFM = Frischmasse, TM = TrockenmasseS = Saatgutbehandlung, S+B = Saatgut- und SubstratbehandlungP = mit Pathogen-Inokulation
-
Tab.22:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen in Feldboden ohne und mit Inokulation durch Phoma pinodella bei 20 °CFM = Frischmasse, TM = TrockenmasseS = Saatgutbehandlung, S+B = Saatgut- und SubstratbehandlungP = mit Pathogen-Inokulation
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Tab.23:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen in Feldboden ohne und mit Inokulation durch Phoma pinodella bei 25 °CFM = Frischmasse, TM = TrockenmasseS = Saatgutbehandlung, S+B = Saatgut- und SubstratbehandlungP = mit Pathogen-Inokulation
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Tab.24:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen in Feldboden ohne und mit Inokulation durch Phoma pinodella [% zur inokulierten Kontrolle]FM = Frischmasse, TM = TrockenmasseS = Saatgutbehandlung, S+B = Saatgut- und SubstratbehandlungP = mit Pathogen-Inokulation
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Tab.25:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf den Krankheitsbefall von Erbsenpflanzen in Feldboden ohne und mit Inokulation durch Phoma pinodella [Krankheitsindex in %, Spalte Gesamt: Krankheitsbefall in % zur inokulierten Kontrolle]Signifikante Unterschiede gegenüber der inokulierten Kontrolle sind bei den drei Temperaturstufen mit „*“ gekennzeichnet (nach
Kruskal-Wallis-H-Test).
P = mit Pathogen-Inokulation
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Tab.26:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen in Feldboden bei 20 °C nach 60 Tagen VersuchsdauerFM = Frischmasse, TM = TrockenmasseS = Saatgutbehandlung, B = Substratbehandlung, S+B = Saatgut- und Substratbehandlung
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Tab.27:Einfluss verschiedener Bacillus
subtilis-Behandlungen auf den Krankheitsindex von Erbsenpflanzen in Feldboden ohne Inokulation mit Phoma pinodella nach 60 Tagen bei 20 °CSignifikante Unterschiede gegenüber der Kontrolle sind mit „*“ gekennzeichnet (nach Kruskal-Wallis-H-Test).
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Tab.28:Entwicklung der Populationsdichte von Bacillus subtilis in der Rhizoplane von Erbsenpflanzen bei 30 Tagen Versuchsdauer [log cfu / g Trockenmasse]n.e. = nicht ermittelt
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Tab.29:Entwicklung der Populationsdichte von Bacillus subtilis im Substrat bei 30 Tagen Versuchsdauer [log cfu / g Trockenmasse]n.e. = nicht ermittelt
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Tab.30:Entwicklung der Gesamtkeimzahl an der Wurzelspitze von Erbsenpflanzen im Verlauf von 30 Tagen Versuchsdauer [log cfu / g Trockenmasse]
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Tab.31:Entwicklung der Gesamtkeimzahl im Substrat im Verlauf von 30 Tagen Versuchsdauer [log cfu / g Trockenmasse]n.e. = nicht ermittelt
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Tab.32:Aktivitätsdynamik von Bacillus subtilis in der Rhizosphäre von Erbsenpflanzen bei 30 Tagen Versuchsdauer, gemessen am Versporungsgrad [%]
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Tab.33:Aktivitätsdynamik von Bacillus subtilis in der Rhizoplane von Erbsenpflanzen bei 30 Tagen Versuchsdauer, gemessen am Versporungsgrad [%]; n.e. = nicht ermittelt
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Tab.34:Aktivitätsdynamik von Bacillus subtilis im Substrat bei 30 Tagen Versuchsdauer, gemessen am Versporungsgrad [%]
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Tab.35:Einfluss verschiedener Behandlungen auf die Gesamtkeimzahlen an der Wurzelspitze von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer [log cfu / g Trockenmasse]GWH = Gewächshaus, KK = Klimakammer, RG = Rakshak Goldangewandter Titer: jeweils 108 cfu B. subtilis / ml
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Tab.36:Einfluss verschiedener Behandlungen auf die Gesamtkeimzahlen im Substrat nach 30 Tagen Versuchsdauer [log cfu / g Trockenmasse]GWH = Gewächshaus, KK = Klimakammer, RG = Rakshak Goldangewandter Titer: jeweils 108 cfu B. subtilis / ml
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Tab.37:Mittlerer Versporungsgrad von Bacillus subtilis FZB47 in der Rhizosphäre von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer mit und ohne Pathogen-Inokulation und Zusatz des Neem-Präparates Rakshak Gold (RG)GWH = Gewächshaus, KK = Klimakammer
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Tab.38:Mittlerer Versporungsgrad von Bacillus subtilis FZB47 in der Rhizoplane von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer mit und ohne Pathogen-Inokulation und Zusatz des Neem-Präparates Rakshak Gold (RG)GWH = Gewächshaus, KK = Klimakammer
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Tab.39:Mittlerer Versporungsgrad von Bacillus subtilis FZB47 im Substrat nach 30 Tagen Versuchsdauer mit und ohne Pathogen-Inokulation und Zusatz des Neem-Präparates Rakshak Gold (RG)GWH = Gewächshaus, KK = Klimakammer
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Tab.40:Einfluss verschiedener Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer in Feldboden (Gewächshaus)FM = Frischmasse, RG = Rakshak Gold
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Tab.41:Einfluss verschiedener Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer in Aussaaterde (Gewächshaus)FM = Frischmasse, TM = Trockenmasse, RG = Rakshak Gold
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Tab.42:Einfluss verschiedener Behandlungen auf das vegetative Wachstum von Erbsenpflanzen nach 30 Tagen Versuchsdauer in Aussaaterde (Klimakammer)FM = Frischmasse, TM = Trockenmasse, RG = Rakshak Gold
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Tab.43:Einfluss verschiedener Behandlungen auf den Krankheitsindex von Erbsenpflanzen in Feldboden nach 30 Tagen (Gewächshausversuch)+ = signifikant überlegen (niedrigerer Krankheitsindex)- = signifikant unterlegen (höherer Krankheitsindex)0 = Varianten nicht verglichenn.s. = nicht signifikant
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Tab.44:Einfluss verschiedener Behandlungen auf den Krankheitsindex von Erbsenpflanzen in Aussaaterde nach 30 Tagen (Gewächshausversuch)+ = signifikant überlegen (niedrigerer Krankheitsindex)- = signifikant unterlegen (höherer Krankheitsindex)0 = Varianten nicht verglichenn.s. = nicht signifikant
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Tab.45:Einfluss verschiedener Behandlungen auf den Krankheitsindex von Erbsenpflanzen in Aussaaterde nach 30 Tagen (Klimakammer)+ = signifikant überlegen (niedrigerer Krankheitsindex)- = signifikant unterlegen (höherer Krankheitsindex)0 = Varianten nicht verglichenn.s. = nicht signifikant
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| DiML DTD Version 3.0 | Zertifizierter Dokumentenserver der Humboldt-Universität zu Berlin | HTML-Version erstellt am: 17.06.2004 |