| Autor(en): |
Ilona Ryseck |
Titel: |
Modulation von Proliferation und Migration boviner kornealer Endothelzellen in Kultur durch humanes Kammerwasser, Transforming Groth Factor-Beta 2 und Ascorbinsäure |
| Gutachter: |
H.-J. Thiel; M. Wiederholt; P. Rieck |
| Erscheinungsdatum: |
17.07.2000 |
| Volltext: |
html
(urn:nbn:de:kobv:11-10015862)
pdf
(urn:nbn:de:kobv:11-10015875)
|
| Fachgebiet(e): |
Medizin |
| Schlagwörter (ger): |
Endothelzellen, Zellkultur, Ascorbinsäure, TGF-beta2, Kammerwasser |
| Schlagwörter (eng): |
Endothelial-cells, Ascorbic-asset, TGF-beta2, aqueous-humor, cell-culture |
| Einrichtung: |
Humboldt-Universität zu Berlin, Medizinische Fakultät - Universitätsklinikum Charité |
| Zitationshinweis: |
Ryseck, Ilona:
Modulation von Proliferation und Migration boviner kornealer Endothelzellen in Kultur durch humanes Kammerwasser, Transforming Groth Factor-Beta 2 und Ascorbinsäure;
Dissertation,
Humboldt-Universität zu Berlin, Medizinische Fakultät - Universitätsklinikum Charité , publiziert am 17.07.2000, urn:nbn:de:kobv:11-10015880
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| Abstract (ger): |
| Einleitung: Die Wundheilung kornealer Endothelzellen erfolgt hauptsächlich durch
Migration benachbarter Zellen. Die Endothelzellen sind in vivo ständig in
Kontakt mit Kammerwasser (KW). TGF-ß2 und Ascorbin- säure (AS) sind in hoher
Konzentration im KW enthalten. Der Einfluß von humanem KW, TGF-ß2 und AS auf
Proliferation und Migration boviner kornealer Endothelzellen (BCEC) in Kultur
wurde untersucht.
Methoden: Proliferation: BCEC der 1.Passage wurden zu 1,5x104 Zellen/Well
ausgesät. Mit frischem Medium und Zusatz von humanem KW (10% und 100%), TGF-ß2
(0,1; 1 und 10 ng/ml) und AS (50, 100 und 200 µg/ml) wurden die Kulturen für 72
oder 96 h inkubiert und anschließend gezählt. Migration: Konfluente Zellkulturen
der 1.Passage wurden verwendet. Mit einem modifizierten Trepan (Durchmesser 5,5
mm) wurde eine zentrale, zirkuläre "Wunde" gesetzt. Die Kulturen wurden mit
frischem Medium, das humanes KW, TGF-ß2 und AS in den o. g. Konzentrationen
enthielt, für 72 oder 96 h inkubiert. Zur Auswertung wurden die in den
Wundbereich migrierten Zellen an 5 verschiedenen Stellen, ausgehend vom
Wundrand, gezählt.
Ergebnisse: Die Proliferation der BCEC wurde durch humanes KW (unverdünntes KW:
nahezu 100%; 10%iges KW: 30%) und Ascorbinsäure (ca. 90% bei AS 200 µg/ml)
gehemmt. TGF-ß2 stimulierte die Proliferation bis zu einem 3fachen Wert der
Kontrollen. Die Migration wurde durch humanes KW (unverdünntes KW: nahezu 100%;
10%iges KW: 30%) und TGF-ß2 (ca. 50% bei allen Konzentrationen) gehemmt. AS
hatte einen stimulierenden Einfluß (20-50%) auf die Migration.
Schlußfolgerung: Noch ist unklar, welche Substanzen im KW für den
proliferationshemmenden Einfluß auf korneale Endothelzellen verantwortlich sind.
Sowohl AS als auch TGF-ß2 zeigten einen gegensätzlichen Effekt auf Proliferation
und Migration kultivierter BCEC. Die Bedeutung dieser Beobachtungen für die
Wundheilung humaner kornealer Endothelzellen in vivo ist Gegenstand weiterer
Untersuchungen. |
| Abstract (eng): |
| Purpose: Corneal endothelial cells are non-proliferating, wound healing
primarily occurs by migration of adjacent cells. Endothelial cells in vivo are
constantly exposed to aqueous humor (AH). Elevated concentrations of TGF-ß2 and
ascorbic acid (AA) are present in aqueous humor. The influence of human AH, TGF-
ß2 and AA on proliferation and migration of bovine corneal endothelial cells in
vitro was investigated.
Methods: Proliferation assays: BCEC at first passage were seeded at 1.5x104
cells/well. Fresh medium containing human AH (10% and 100%), TGF-ß2 (0,1;1 and
10 ng/ml) and AA (50, 100 and 200 µg/ml) was added to the cells. 72 or 96 hours
later the cells were counted. Migration assays: BCEC at first passage were grown
to confluency. A central, circular "wound" was made with an especially designed
trephine (diameter 5.5 mm). The cultures were incubated with fresh medium
containing human AH, TGF-ß2 and AA in the same concentrations for 72 or 96
hours. The cells were then counted in five randomly chosen sections from the
wound edge.
Results: Proliferation of BCE cells was inhibited by human AH (pure AH: nearly
100%, 10% AH: 30%) and AA (about 90% at 200 µg/ml). TGF-ß2 stimulated the
proliferation up to 3 fold compared to the controls. Migration was inhibited by
human AH (pure AH: nearly 100%, 10% AH: 30%) and TGF-ß2 (about 50% at all
concentrations). AA had a stimulatory effect (20-50%) on migration.
Conclusion: Presently, it remains unknown which substances in AH are responsible
for the inhibiting effect on corneal endothelial proliferation. Both TGF-ß2 and
AA showed to have a differential effect on proliferation and migration of
cultured BCE cells. The significance of these observations for wound healing of
human corneal endothelial cells in vivo has to be investigated. |
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