| Autor(en): |
Matthias Prigge |
Titel: |
Über die elektrophysiologische Untersuchung und Entwicklung von farbverschobenen Kanalrhodopsinchimären aus der Grünalge Volvox carteri |
| Gutachter: |
Peter Hegemann; Thomas Friedrich; Franz Bartl |
| Erscheinungsdatum: |
01.08.2012 |
| Volltext: |
pdf
(urn:nbn:de:kobv:11-100203476)
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| Fachgebiet(e): |
Biowissenschaften, Biologie |
| Schlagwörter (ger): |
Optogenetik, Kanalrhodopsine, Farbveränderung, Volvox carteri, Kalziumfarbstoffe |
| Schlagwörter (eng): |
Channelrhodosin, Colour-tuning, Optogenetics, Volvox carteri, Caclium dyes |
| Einrichtung: |
Humboldt-Universität zu Berlin, Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät I |
| Lizenz: |
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| Zitationshinweis: |
Prigge, Matthias:
Über die elektrophysiologische Untersuchung und Entwicklung von farbverschobenen Kanalrhodopsinchimären aus der Grünalge Volvox carteri;
Dissertation,
Humboldt-Universität zu Berlin, Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät I , publiziert am 01.08.2012, urn:nbn:de:kobv:11-100203476
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| Abstract (ger): |
| Die Entdeckung der Kanalrhodopsine (ChRs) C1 und C2 aus der Grünalge
Chlamydomonas reinhartii vor 10 Jahren brachte die neue Proteinfamilie der
lichtgesteuerten Ionenkanäle hervor. Diese 7-Transmembranproteine verwenden
all-trans Retinal, um Licht einer bestimmten Wellenlänge zu absorbieren. Bei
Lichtabsorption isomerisiert das Retinal und das Protein öffnet daraufhin seine
Pore, die es Ionen wie H+, Na+ und Ca2+ erlaubt, abhängig von ihrem
elektrochemischen Gradienten, die Membran zu passieren. Insbesondere in der
Neurophysiologie findet seit kurzem das C2 eine breite Anwendung, da seine
Expression in Nervenzellen es erlaubt, mittels kurzer Lichtpulse die elektrische
Aktivität dieser Zellen zu kontrollieren. In dieser Arbeit wurden zum ersten
Mal die beiden neuen ChRs V1 und V2 aus der mehrzelligen Grünalge Volvox
carteri elektrophysiologisch charakterisiert. Hierbei zeigte sich, dass V2, ähnlich
wie C2, im blauen Spektralbereich absorbiert und auch, dass sich die kinetischen
Eigenschaften stark ähneln. Dagegen besitzt V1 eine um 70 nm längerwellig
verschobene Absorption auf 535 nm bei einer 10 x langsameren Abklingkinetik
als C2. Durch die schlechte Membranintegration von V1 in eukaryotischen Zellen ist
der Photostrom gering und die Anwendungen in Neuronen stark eingeschränkt. Um
die Membranintegration zu verbessern, wurden einzelne Helices von V1 gegen die
entsprechenden Helices der anderen ChRs ausgetauscht. Hierbei wurde eine Chimäre
C1V1-25, die aus den ersten 2 Helices von C1 und den restlichen 5 Helices von V1
besteht, entwickelt. Die Chimäre besitzt weiterhin eine rotverschobene Absorption
bei 539 nm, einen 4 x höheren Photostrom als V1 und der doppelt so hoch ist
wie der von C2. |
| Abstract (eng): |
| The discovery of the channelrhodopsins (ChRs), C1 and C2 from the green
alga Chlamydomonas reinhardtii 10 years ago, created the new protein family of
light-gated ion channels. Those 7-Transmembranproteins are utilizing all-trans
retinal to absorb light at specific wavelength. Upon light absorption the retinal
isomerizes which leads to opening of a protein pore allowing ions such as H+, Na+
and Ca2+ to pass the membrane depending on their electrochemical gradient. In
the last years C2 attracted a lot of attention in neuroscience since its expression in
neurons allows to control their electrical properties with short light pulses. This work
presents the electrophysiological characterization of two new ChRs V1 and V2 from
the multicellular agla Volvox carteri for the first time . V2 absorbs light in the blue
visible range like C2 and almost identical kinetic properties. In contrast, V1 exhibit
a 70 nm redshifted absorption towards 535 nm and a 10 x slower off-kinetic than
C2. Since V1 displays only weak membrane targeting the resulting overall small
photocurrent in eukaryotic cells significantly hampered its application in neuronal
cells. To improve membrane targeting and to retain redshifted absorbance helices
from V1 were exchanged with the corresponding helices from the other ChRs. A
chimera called C1V1-25, which consists out of the first 2 helices from C1 and the
last 5 helices from V1 showed a absorbance maximum at 539 nm and exhibit a
4 times higher photocurrent even beeing 2 times higher then the one of C2. |
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