edoc-Server der Humboldt-Universität zu Berlin

Dissertation

Autor(en): Hauke Schneider
Titel: Identifikation Apoptose-assoziierter Gene in B-Zellen und Charakterisierung des Genproduktes LAPTM5
Gutachter: B. Dörken; F. Zipp; G. Riethmüller
Erscheinungsdatum: 16.01.2003
Volltext: html (urn:nbn:de:kobv:11-10036479)
pdf (urn:nbn:de:kobv:11-10018611)
Fachgebiet(e): Medizin
Schlagwörter (ger): Apoptose, B-Zellen, LAPTM5, Lysosomen, episomal
Schlagwörter (eng): B cells, Apoptosis, LAPTM5, Lysosomes, episomal
Einrichtung: Humboldt-Universität zu Berlin, Medizinische Fakultät - Universitätsklinikum Charité
Zitationshinweis: Schneider, Hauke: Identifikation Apoptose-assoziierter Gene in B-Zellen und Charakterisierung des Genproduktes LAPTM5; Dissertation, Humboldt-Universität zu Berlin, Medizinische Fakultät - Universitätsklinikum Charité , publiziert am 16.01.2003, urn:nbn:de:kobv:11-10018611
Metadatenexport: Um den gesamten Metadatensatz im Endnote- oder Bibtex-Format zu speichern, klicken Sie bitte auf den entsprechenden Link. Endnote   Bibtex  
print on demand: Wenn Sie auf dieses Icon klicken, können Sie ein Druckexemplar dieser Publikation bestellen.
Diese Seite taggen: Diese Icons führen auf so genannte Social-Bookmark-Systeme, auf denen Sie Lesezeichen anlegen, persönliche Tags vergeben und Lesezeichen anderer Nutzer ansehen können.
  • connotea
  • del.icio.us
  • Furl
  • RawSugar

Abstract (ger):
Programmierter Zelltod (PCD) oder Apoptose ist ein universeller biologischer Prozess, der in multizellulären Organismen essentiell ist für die Differenzierung und Homöostase von Geweben. Bei der Entwicklung eines funktionsfähigen zellulären Immunsystems können autoreaktive Zellen entstehen. Die negative Selektion von unreifen, autoreaktiven B-Zellen erfolgt durch IgM-vermittelte Apoptose und ist von de novo Transkription abhängig. Die genauen Mechanismen der IgM-vermittelten Apoptose und die involvierten Genprodukte sind nur unzureichend charakterisiert. Zur Identifikation Apoptose-assoziierter Gene in B-Zellen wurden die Differential Display-Analyse durchgeführt und die Expressionsmuster apoptotischer und nicht-apoptotischer BL60-Zellen untersucht. Es wurden 38 differentielle Fragmente identifiziert und kloniert. Sequenzanalysen ergaben Homologien eines Fragments mit LAPTM5, einem lysosomal-assoziierten Transmembran-Protein mit vorwiegender Expression in hämatopoetischem Gewebe. Northern Blot-Analysen zeigten 2 Stunden nach Inkubation von BL-60-Zellen mit anti-IgM einen Anstieg der Genexpression von LAPTM5. Das LAPTM5-Gen liegt auf Chromosom 1 (1p34), ist evolutionär konserviert und besitzt keine Homologien zu bekannten Genen. Die Untersuchung der gewebespezifischen Expression von LAPTM5 ergab neben der hohen Expressionsrate in hämatopoetischem Gewebe eine sehr starke Expression in Skelett- und Herzmuskelgewebe. Elektronenmikroskopisch zeigte sich eine Lokalisation des Proteins in späten Endosomen und Lysosomen. Daneben konnte LAPTM5 auch auf der Oberfläche von BL60-Zellen detektiert werden. Während des apoptotischen Prozesses bleibt die Menge an LAPTM5 auf der Zelloberfläche konstant. Zur weiteren Charakterisierung von LAPTM5 und anderen Kandidaten-Genen wurde ein episomales Expressions- und Selektionssystem entwickelt. Cotransfektionsanalysen unter Verwendung eines GFP (green fluorescent protein)- Konstrukts zeigten, dass die aufgereinigten Zellen zu 80% das interessierende Gen exprimieren und die Expression länger als vier Wochen anhält.
Abstract (eng):
Programmed cell death (PCD) or apoptosis is a key feature of normal development and tissue homeostasis. In the development of a functional immunesystem the occurence of autoreactive cells is tightly controlled and prevented by apoptosis. The negative selection of autoreactive immature B cells after encountering self antigen occures via surface IgM (sIgM) mediated apoptosis and depends on de novo gene transcription. The precise mechanism of this process and the possible involvement of different genes in the regulation of sIgM-mediated cell death is not understood so far. In order to identify genes associated with B cell apoptosis Differential Display RT-PCR (DD) was performed to analyze sIgM-mediated apoptosis in the human Burkitt lymphoma line BL60. The expression patterns of apoptotic and non-apoptotic cells were investigated and 38 differentially expressed gene fragments were found. Subsequent northern blot analysis showed that LAPTM5, a lysosomal associated membrane protein preferential ly expressed in adult hematopoietic tissue, is up-regulated 2 hours after induction of apoptosis. LAPTM5 is a protein with five transmembrane domains, it is conserved during evolution and the gene, mapping to chromosome 1p34, has no homology to known genes. In contrast to earlier data a very high expression of the protein was detected not only in hematopoietic tissue but also in skeletal muscle and heart muscle. Electronmicroscopy was performed to investigate the subcellular localization in detail and showed that LAPTM5 is mainly present in late endosomes and lysosomes. FACS analysis revealed a surface expression of LAPTM5 and a constant amount of LAPTM5 at the surface during IgM mediated apoptosis. To further investigate the functional role of candidate genes during apoptosis an episomal expression and selection system was established. Cotransfection analysis with GFP (green fluorescent protein) showed that 80% of the separeted cells express the gene of interest for at least four weeks.
Zugriffsstatistik: Die Daten für die Zugriffsstatistik der einzelnen Dokumente wurden aus den durch AWStats aggregierten Webserver-Logs erstellt. Sie beziehen sich auf den monatlichen Zugriff auf den Volltext sowie auf die Startseite. Die Zugriffsstatistik wird nicht standardisiert erfasst und kann maschinelle Zugriffe enthalten.
 
Bei Formatversionen eines Dokuments, die aus mehreren Dateien bestehen (insbesondere HTML), wird jeweils der monatlich höchste Zugriffswert auf eine der Dateien (Kapitel) des Dokuments angezeigt.
 
Um die detaillierten Zugriffszahlen zu sehen, fahren Sie bitte mit dem Mauszeiger über die einzelnen Balken des Diagramms.
Startseite: 2 Zugriffe HTML: 26 Zugriffe PDF: 8 Zugriffe HTML: 31 Zugriffe PDF: 4 Zugriffe Startseite: 2 Zugriffe HTML: 32 Zugriffe PDF: 5 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 39 Zugriffe PDF: 8 Zugriffe Startseite: 2 Zugriffe HTML: 44 Zugriffe PDF: 12 Zugriffe Startseite: 2 Zugriffe HTML: 24 Zugriffe PDF: 6 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 35 Zugriffe PDF: 16 Zugriffe Startseite: 12 Zugriffe HTML: 36 Zugriffe PDF: 15 Zugriffe Startseite: 2 Zugriffe HTML: 24 Zugriffe PDF: 12 Zugriffe Startseite: 2 Zugriffe HTML: 40 Zugriffe PDF: 18 Zugriffe Startseite: 2 Zugriffe HTML: 23 Zugriffe PDF: 14 Zugriffe HTML: 28 Zugriffe PDF: 9 Zugriffe Startseite: 4 Zugriffe HTML: 32 Zugriffe PDF: 23 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 29 Zugriffe PDF: 10 Zugriffe Startseite: 4 Zugriffe HTML: 43 Zugriffe PDF: 15 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 17 Zugriffe PDF: 8 Zugriffe Startseite: 2 Zugriffe HTML: 55 Zugriffe PDF: 21 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 30 Zugriffe PDF: 24 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 29 Zugriffe PDF: 15 Zugriffe Startseite: 4 Zugriffe HTML: 21 Zugriffe PDF: 20 Zugriffe HTML: 25 Zugriffe PDF: 29 Zugriffe Startseite: 2 Zugriffe HTML: 25 Zugriffe PDF: 17 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 36 Zugriffe PDF: 14 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 21 Zugriffe PDF: 17 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 20 Zugriffe PDF: 14 Zugriffe Startseite: 3 Zugriffe HTML: 31 Zugriffe PDF: 28 Zugriffe Startseite: 2 Zugriffe HTML: 38 Zugriffe PDF: 23 Zugriffe HTML: 27 Zugriffe PDF: 20 Zugriffe HTML: 49 Zugriffe PDF: 20 Zugriffe Startseite: 3 Zugriffe HTML: 38 Zugriffe PDF: 21 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 31 Zugriffe PDF: 16 Zugriffe HTML: 26 Zugriffe PDF: 12 Zugriffe Startseite: 1 Zugriffe HTML: 23 Zugriffe PDF: 19 Zugriffe HTML: 38 Zugriffe PDF: 24 Zugriffe Startseite: 3 Zugriffe HTML: 34 Zugriffe PDF: 34 Zugriffe
Jul
11
Aug
11
Sep
11
Oct
11
Nov
11
Dec
11
Feb
12
Apr
12
May
12
Jun
12
Jul
12
Aug
12
Sep
12
Oct
12
Nov
12
Dec
12
Jan
13
Feb
13
Mar
13
Apr
13
May
13
Jun
13
Jul
13
Aug
13
Sep
13
Oct
13
Nov
13
Dec
13
Jan
14
Feb
14
Mar
14
Apr
14
May
14
Jun
14
Jul
14
Monat Jul
11
Aug
11
Sep
11
Oct
11
Nov
11
Dec
11
Feb
12
Apr
12
May
12
Jun
12
Jul
12
Aug
12
Sep
12
Oct
12
Nov
12
Dec
12
Jan
13
Feb
13
Mar
13
Apr
13
May
13
Jun
13
Jul
13
Aug
13
Sep
13
Oct
13
Nov
13
Dec
13
Jan
14
Feb
14
Mar
14
Apr
14
May
14
Jun
14
Jul
14
Startseite 2   2 1 2 2 1 12 2 2 2   4 1 4 1 2 1 1 4   2 1 1 1 3 2     3 1   1   3
HTML 26 31 32 39 44 24 35 36 24 40 23 28 32 29 43 17 55 30 29 21 25 25 36 21 20 31 38 27 49 38 31 26 23 38 34
PDF 8 4 5 8 12 6 16 15 12 18 14 9 23 10 15 8 21 24 15 20 29 17 14 17 14 28 23 20 20 21 16 12 19 24 34

Gesamtzahl der Zugriffe seit Jul 2011:

  • Startseite – 64 (1.83 pro Monat)
  • HTML – 1100 (31.43 pro Monat)
  • PDF – 571 (16.31 pro Monat)
 
 
Generiert am 30.08.2014, 05:29:32