↓22 |
ABI PRISM® 7000 Sequence Detection System (TaqMan-PCR-Cycler) |
Applied Biosystems, Darmstadt |
Blotting Box |
Biometra, Göttingen |
Brutschrank Heracell |
Heraeus, Hanau |
Elektrophoresekammer |
Biometra, Göttingen |
Entwicklungsmaschine X-OMAT 5000RA |
Kodak, Stuttgart |
Feinwaage MC 210 S |
Sartorius, Göttingen |
GelBond®PAG Film (21.0 x 21.3cm) |
Serva, Heidelberg |
Geldokumentationssystem BioDocAnalyze |
Biometra, Göttingen |
Gene Quant II RNA/DNA CalculatorPharmacia |
Biotech, Freiburg |
Horizontales Elektrophoresesystem Easy-Cast™ |
AGS, Heidelberg |
Hybridisierungsofen |
OV 3Biometra, Göttingen |
HypercassetteTM |
Amersham Biosciences, Freiburg |
HyperfilmTM ECL |
Amersham Bioscience, Freiburg |
Kamera (Lichtmikroskop) Olympus PM-C35DX |
Olympus, Hamburg |
Konzentrator T 301 |
Eppendorf, Hamburg |
Leuchtkasten |
Roth, Karlsruhe |
Lichtmikroskop Olympus BX60 |
Olympus, Hamburg |
Magnetrührer MR3001 |
Heidolph, Kehlheim |
Mikrowellenherd (Modell M 706) |
Philips, Hamburg |
Mikroplattenreader |
Perkin Elmer, Weiterstadt |
Mikrotom HM 360 |
Microm International GmbH, Walldorf |
Nitrocellulosemembran Hybond ECL |
Amersham International, Bucks, UK |
PCR-Thermocycler Gene Amp PCR System 2400 |
Perkin Elmer, Weiterstadt |
Perfect WesternTM (Inkubationsbox) |
GenHunter, Nashville, TN, USA |
pH-Meter GPHR 1400A |
Greisinger, Regenstauf |
Pipetten und Pipettenspitzen |
Eppendorf, Hamburg |
Präzisionsküvette aus Quarzglas SUPRASIL® |
Hellma, Mühlheim |
Rotationsvibratom VT 1000 S |
Leica Microsystem, Nussloch |
Schüttelinkubator Thermomixer 5436 |
Eppendorf, Hamburg |
Spacer |
Diagen, Hilden |
Spektralphotometer Ultraspec® III |
Pharmacia, Freiburg |
Stereotaktisches Gerät |
David Kopf Instruments, Tujunga, USA |
Stromversorgungsgerät EPS 3500 |
Pharmacia, Freiburg |
Taumel-Wipptisch WT12 |
Biometra, Göttingen |
TGGE-Gelkammer für Polyacrylamidgele |
Diagen, Hilden |
Thermomixer 5436 |
Eppendorf, Hamburg |
Thermostat KH-3 |
Biometra, Göttingen |
Tischzentrifuge 5415C und 5417 R |
Eppendorf, Hamburg |
Trans-Blot-SD-System |
Bio-Rad Laboratories, München |
Trockenschrank B12 |
Heraeus, Hanau |
UV-Transilluminator TI 1 |
Biometra, Göttingen |
Vakuumzentrifuge Concentrator 5301 |
Eppendorf, Hamburg |
Vortexgerät Genie 2 |
Scientific Industries, Bohemia, USA |
Waage BL 1500 S |
Sartorius, Göttingen |
3-Aminopropyltriethoxysilan |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Aceton |
Merck, Darmstadt |
Acrylamid |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Agarose (ultra pure) |
Gibco BRL, Eggenstein |
Allantoin |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Ammoniumhydroxid |
Fluka, Buchs, Schweiz |
Aprotinin |
Fluka, Buchs, Schweiz |
APS |
Serva, Heidelberg |
Aqua-Spüllösung |
Delta-Pharma, Pfullingen |
Azur B |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
β-Mercaptoethanol |
Fluka, Buchs/Schweiz |
Borsäure |
Merck, Darmstadt |
Bromphenolblau |
Merck, Darmstadt |
BSA |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
chirurgisches Instrumentarium |
Aesculap, Tuttlingen |
Chloralhydrat |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Chloroform |
Merck, Darmstadt |
Citronensäure-Monohydrat |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Coumarin-Säure |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
DAB |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Desoxynukleosid-Triphosphate (dNTPs) |
Promega, Madison, USA |
DMSO |
Fluka, Buchs, Schweiz |
DTT |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
EDTA |
Merck, Darmstadt |
Essigsäure |
Merck, Darmstadt |
Ethanol (vergällt und unvergällt) |
Merck, Darmstadt |
Ether zur Narkose ASID® |
ASID Bonz, Böblingen |
Ethidiumbromid |
Merck, Darmstadt |
Formaldehyd (37%ige Lösung) |
Riedel-de Haën, Seelze |
Formamid |
Fluka, Buchs, Schweiz |
Glycerin |
Merck, Darmstadt |
Glycin |
ICN Biomedicals, Aurora, USA |
Glycogen |
Boehringer, Mannheim |
Heparin |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Isopropanol |
Merck, Darmstadt |
Kaliumchlorid |
Roth, Karlruhe |
Kaliumferrizyanid |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Kupfernitrat |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Leupeptin |
Serva, Heidelberg |
Luminol |
Fluka, Buchs, Schweiz |
Magermilchpulver |
Roth, Karlsruhe |
Magnesiumchlorid |
Merck, Darmstadt |
Mayers Hämalaun |
Merck, Darmstadt |
Methylenblau |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Methylgrün |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Natriumacetat |
Merck, Darmstadt |
Natriumcacodylat |
Sigma, St. Louis, USA |
Natriumcarbonat |
Fluka, Buchs, Schweiz |
Natriumchlorid |
Merck, Darmstadt |
Natriumhydroxid |
Merck, Darmstadt |
Natriumtetraborat |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Natriumthiosulfat |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Oligo-d(T)-Primer |
Promega, Mannheim |
Paraformaldehyd |
Merck, Darmstadt |
PBS-Lösung |
Gibco, Paisley, Schottland |
Pepstatin A |
Fluka, Buchs, Schweiz |
Permount Mounting Medium |
EMS, Fort Washington, USA |
Ponceau-Rot |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Pyridin |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Roti-Phenol/Chloroform-Lösung |
Roth, Karlsruhe |
Salpetersäure (65%) |
Merck, Darmstadt |
Salzsäure (37%, rauchend) |
Merck, Darmstadt |
Sigmacote® |
Sigma, St. Louis, USA |
SDS |
Roth, Karlsruhe |
Silan |
Sigma-Aldrich, Steinheim |
Silbernitrat |
Merck, Darmstadt |
TEMED |
Serva, Heidelberg |
Tris |
Serva, Heidelberg |
Triton X-100 |
Sigma, St. Louis, USA |
Tween 20 |
Fluka, Buchs, Schweiz |
Wasserstoffperoxid |
Merck, Darmstadt |
Xylencyanol |
Merck, Darmstadt |
↓23 |
Bezeichnung |
Zusammensetzung |
Blotting-Transferpuffer |
0,04M Tris, 0306M Glycin |
Boratpuffer (pH 8,5) |
20mM Borsäure |
Coumarinsäure Stammlösung |
90mM Coumarinsäure (in DMSO) |
DNA-Probenpuffer (für Agarosegele) |
0,1% (w/v) Bromphenolblau |
DNA-Probepuffer (für Polyacrylamidgele) |
0,1% (w/v) Bromphenolblau |
ECL-Lösung 1 |
2,5mM Luminol, |
ECL-Lösung 2 |
100mM Tris-HCl (pH 8,5) |
1% Essigsäurelösung |
5ml 100% Essigsäure |
Fixierungslösung II (4% Paraformaldehydlösung, pH 7,4) |
4% (w/v) Paraformaldehyd |
Heparinlösung |
0,17% (v/v) Heparin in 1x PBS |
Kupfer-Silber-Lösung |
1,5g Silbernitrat, |
Laemmli-Puffer |
2ml 0,625 M Tris/HCl (pH 6,8), |
10 x Laufgelpuffer |
72g Glycerin, |
Luminol Stammlösung |
250mM Luminol (in DMSO) |
Lysepuffer, pH 7,6 (Extraktionspuffer) |
50mM Tris, 166mM KCL |
Magermilchlösung |
2,5g Magermilchpulver ad |
Natriumcarbonatlösung 0,3M |
59,36g Na2 CO2, 0,968ml Formalin, |
PAGE-Laufpuffer |
90ml 10 x TBE-Puffer, 50ml Glycerin, |
PAGE-Lösung |
12,6g Glycerin, |
PCR-H2O |
Bidest-H2O autoklaviert |
Polyacrylamidgel-Elektrophorese-Puffer |
5% (v/v) Glycerin, 0,9x TBE |
10x Polyacrylamidgel-Elektrophorese-Puffer |
0,192M Glycin, 0,1% SDS, |
5x Reaktionspuffer |
50mM DTT, 0,375M Kaliumchlorid, |
Reduktionslösung (DeOlmos Kupfersilberfärbung) |
0,007% (w/v) Citronensäure, |
2 % Salpetersäure |
15ml 65% Salpetersäure, |
4 x Sammmelgelpuffer, pH 6,8 |
30,3g Tris, 2g SDS, |
Silberdiaminlösung (DeOlmos Kupfersilberfärbung) |
0,13M Ammoniumhydroxid |
0,2% Silbernitratlösung |
0,6g Silbernitrat, |
Strippingpuffer |
0,1M β-Mercaptoethanol, |
10 x TAE-Puffer, pH 7,7 |
10mM EDTA (pH 8,0), |
10 x TBE-Puffer, pH 8,3 |
1M Borsäure,20mM EDTA, 0,5M Tris |
10 x TBS |
0,1M Tris-HCl (pH 7,4), |
0,1 % TBS-Tween |
100ml 1x TBS,1ml Tween 20, |
4 x Trenngelpuffer |
90,8g Tris, 2g SDS, |
Wasserstoffperoxid-Methanol-Lösung |
75% (v/v) Methanol, |
ABC Kit |
Vector Laboratories, Peterborough, England |
ApopTag® In Situ Apoptosis Detection Kit |
Oncor Appligene, Heidelberg |
Bicinchoninic Acid Kit |
Interchim, Cedex, Frankreich |
RNAClean™ |
AGS, Heidelberg |
AmpliTaq® DNA Polymerase |
Perkin Elmer, Weiterstadt |
DNase I, RNase-frei |
Boehringer, Mannheim |
M-MLV-Reverse Transkriptase |
Promega, Mannheim |
Rnasin® Ribonuclease Inhibitor |
Promega, Mannheim |
↓24 |
Akt (polyklonaler Kaninchen-Antikörper) |
Cell Signaling, New England Biolabs GmbH, Frankfurt |
p-Akt (polyklonaler Kaninchen-Antikörper) |
Cell Signaling, New England Biolabs GmbH, Frankfurt |
Caspase-3 Antikörper |
Cell Signaling, New England Biolabs GmbH, Frankfurt |
p-MAPK (polyklonaler Kaninchen-Antikörper) (p-ERK1/2) |
Cell Signaling, New England Biolabs GmbH, Frankfurt |
MAPK (monoklonaler Maus-Antikörper) (ERK1/2 ) |
Cell Signaling, New England Biolabs GmbH, Frankfurt |
Fas (monoklonaler Maus-Antikörper) |
Transduction Laboratories, Heidelberg |
Bezeichnung |
Bezugsquelle |
Oligo(dT)15 Primer |
Promega, Mannheim |
Die verwendeten, synthetischen Oligonukleotide wurden vom Biochemisch-Technologischen Zentrum (BioTeZ) in Berlin-Buch bezogen.
↓25 |
Die Sequenzen der folgenden Oligonukleotide wurden aufgrund von Veröffentlichungen ausgewählt bzw. mittels Software Primerdesign 4.0 selbst entworfen. Die verwendeten Primer erfüllen dabei bestimmte Kriterien:
Name |
Sequenz (5‘-3‘) |
Genbank Acs.No. |
Produkt |
Position |
Apoptotische Gene |
||||
Fas |
D26112 |
227bp | ||
Sense-Primer |
CCGACAACAACTGCTCAGA |
174-192nt |
||
Antisense-Primer |
GCACCTGCACTTGGTATTC |
412-430nt |
||
Wachstumsfaktoren |
||||
BDNF |
D10938 |
491bp | ||
Sense-Primer |
CGACGTCCCTGGCTGACACTTTT |
2296-2316nt |
||
Antisense-Primer |
AGTAAGGGCCCGAACATACGATTGG |
2762-2786nt |
||
Neurotrophin-3 |
M34643 |
484bp | ||
Sense-Primer |
GGTCAGAATTCCAGCCGATGATTGC |
308-332nt |
||
Antisense-Primer |
CAGCGCCAGCCTACGAGTTTGTTGT |
767-791nt |
||
NGF |
M36589 |
491bp | ||
Sense-Primer |
CTGAACCAATAGCTGCCCGTGTGAC |
456-480nt |
||
Antisense-Primer |
GGCAGCCTGTTTGTCGTCTGTTGTC |
922-946nt |
||
GDNF |
L15305 |
654bp | ||
Sense-Primer |
CGGGACTCTAAGATGAAGTT |
38-57nt |
||
Antisense-Primer |
CCAGGGTCAGATACATCCAC |
672-691nt |
||
Zytokine |
||||
IL-1 |
NM_031512 |
335bp | ||
Sense-Primer |
GACAGAACATAAGCCAACAAG |
522-542nt |
||
Antisense-Primer |
GTCAACTATGTCCCGACCATT |
836-856nt |
||
IL-10 |
NM_012854 |
352bp | ||
Sense-Primer |
CAATAACTGCACCCACTTCC |
125-144nt |
||
Antisense-Primer |
ATTCTTCACCTGCTCCACTGC |
456-476nt |
||
IL-18 |
NM_019165 |
398bp | ||
Sense-Primer |
TGGAGACTTGGAATCAGACC |
90-109nt |
||
Antisense-Primer |
GGCAAGCTAGAAAGTGTCCT |
468-487nt |
||
Interner Standard (housekeeping gene) |
||||
β -Actin |
V01217 |
897bp | ||
Sense-Primer |
CCCTAAGGCCAACCGTGAAAAGATG |
1663-1687nt |
||
Antisense-Primer |
GAACCGCTCATTGCCGATAGTGATG |
2535-2559nt |
↓26 |
PhiX174 DNA/Hae III Marker |
Promega, Mannheim |
RNA-Molekulargewichtsmarker 0.28–6.58kb |
Promega, Mannheim |
Als Versuchstiere wurden sieben Tage alte Wistar-Ratten (Bundesinstitut für gesundheitlichen Verbraucherschutz und Veterinärmedizin, BgVV, Berlin) verwendet.
Die Jungtiere befanden sich zu jedem Zeitpunkt bei dem Muttertier, um Stressbedingungen der Versuchstiere zu minimieren und einer Hypothermie vorzubeugen. Die Wurfgröße lag zwischen 10 und 15 Versuchstieren.
↓27 |
Bezeichnung Bezugsquelle bzw. Internetadresse
ABI PRISM® 7000 Sequence Detection System Software |
Applied Biosystems, Darmstadt |
Adobe® Photoshop® Elements 2.0 |
Adobe Systems, Unterschleißheim |
Assay by Design File Builder 2..0 |
Applied Biosystems, Darmstadt |
BioDocAnalyze |
Whatman Biometra, Göttingen |
Ensembl Genome Viewer Datenbank |
http://www.ensembl.org |
GraphPad PRISMTM Version 3.0 |
GraphPad Software, San Diego, USA |
NCBI Datenbank |
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/cgi-bin/BLAST |
Primer Designer 4.0 |
Scientific&Educational Software, Durham, USA |
StarOffice 6.0 |
Sun Microsystems, Santa Clara, USA |
TINA Version 2.09g |
Raytest Isotopenmessgeräte, Straubenhardt |
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DiML DTD Version 4.0 | Zertifizierter Dokumentenserver der Humboldt-Universität zu Berlin | HTML-Version erstellt am: 26.10.2005 |