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2002-04-11Dissertation DOI: 10.18452/14714
Untersuchung zur quantitativen Genexpression in Primärkulturen humaner Adipocyten am Beispiel ausgewählter Gene des Renin-Angiotensin-Systems
dc.contributor.authorGorzelniak, Kerstin
dc.date.accessioned2017-06-18T04:44:38Z
dc.date.available2017-06-18T04:44:38Z
dc.date.created2002-03-18
dc.date.issued2002-04-11
dc.identifier.urihttp://edoc.hu-berlin.de/18452/15366
dc.description.abstractWie sich in den letzten Jahren gezeigt hat, ist Fettgewebe nicht nur ein inerter Fettspeicher, sondern produziert auch eine Vielzahl endokrin wirksamer Substanzen, die unter anderem auch an der Blutdruckregulation beteiligt sind. Da Adipositas ein wichtiger Risikofaktor für die Entwicklung der Hypertonie ist, sollte im Rahmen dieser Dissertation ein System zur quantitativen Untersuchung der Genexpression in Primärkulturen humaner Adipocyten entwickelt werden und dessen Funktionalität am Beispiel der hormonellen Regulation der Gene des Renin-Angiotensin-Systems demonstriert werden. Dies beinhaltete die Etablierung der Adipocytenisolierung und -kultivierung, eines Stimulationsassays, die Entwicklung einer der besonderen Größe und dem hohen Fettgehalt der Zellen angepaßten Zellzahl- und Vitalitätsbestimmungsmethode, die Untersuchung vier verschiedener RNA-Extraktionsmethoden auf ihre Eignung für Adipocyten und die Etablierung eines besonders sensitiven RT-PCR Systems zur Untersuchung der Genexpression mittels einer fluoreszenzmarkierten Sonde. Exemplarisch konnte anhand der Renin-Angiotensin-System-Gene die Funktionalität der Methoden demonstriert werden, indem nicht nur die Genexpression aller Komponenten des Renin-Angiotensin-Systems in humanen Adipocyten nachgewiesen wurden, sondern auch gezeigt werden konnte, dass Hydrocortison sowohl die Genexpression als auch die Dichte des Angiotensin II Typ 1-Rezeptors in der Adipocytenmembran stimuliert. Dieser Aspekt könnte möglicherweise nicht nur bei der besonderen Adipositasform des Cushing-Syndroms, sondern auch für die Entstehung der zentralen Adipositas von Bedeutung sein.ger
dc.description.abstractAdipose tissue has functions above-and-beyond storing fat. It also produces a variety of different endocrine substances, some of which influence blood pressure regulation. Obesity is a well known risk factor for the development of hypertension Thus, the genes regulating expression of vasoactive molecules in adipose tissue, possibly contributing to an increase in blood pressure are of great interest. The aim of this work was to develope a system for quantitative gene expression analysis in primary cultured human adipocytes and to demonstrate its utility for studying the hormonal regulation of genes encoding the renin-angiotensin-system. We established procedures for the isolation and culture of human adipocytes, as well as a stimulatory assay. We also developed methods for the determination of cell number and vitality. Above this, four RNA extraction protocols were evaluated regarding their suitability for adipocytes, and a very sensitive RT-PCR system for gene expression analysis using fluorescent labeled probes was established. As an example for the functionality of these methods we showed that all genes of the renin-angiotensin-system are expressed in human adipocytes. We also demonstrated that hydrocortisone stimulates the gene expression as well as the density of the angiotensin II receptor type 1 on cultured human adipocytes. This finding may be of interest for the development of the obesity phenotype found in cushing syndrome, but could also contribute to the development of central obesity.eng
dc.language.isoger
dc.publisherHumboldt-Universität zu Berlin, Medizinische Fakultät - Universitätsklinikum Charité
dc.rights.urihttp://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
dc.subjectAdipocytenger
dc.subjectquantitative RT-PCRger
dc.subjectendogene Kontrollenger
dc.subjectRenin-Angiotensin-Systemger
dc.subjectAT-1 Rezeptor Expressionger
dc.subjectadipocyteseng
dc.subjectquatitativ RT-PCReng
dc.subjectendogenous controlseng
dc.subjectrenin-angiotensin-systemeng
dc.subjectAT-1 receptor expressioneng
dc.subject.ddc610 Medizin und Gesundheit
dc.titleUntersuchung zur quantitativen Genexpression in Primärkulturen humaner Adipocyten am Beispiel ausgewählter Gene des Renin-Angiotensin-Systems
dc.typedoctoralThesis
dc.identifier.urnurn:nbn:de:kobv:11-10016762
dc.identifier.urnurn:nbn:de:kobv:11-10070213
dc.identifier.urnurn:nbn:de:kobv:11-10070223
dc.identifier.doihttp://dx.doi.org/10.18452/14714
dc.date.accepted2002-03-18
dc.contributor.refereeSharma, A.M.
dc.contributor.refereeLöffler, G.
dc.contributor.refereeKlaus, S.
dc.subject.dnb33 Medizin
dc.subject.rvkYC 1400
local.edoc.pages124
local.edoc.type-nameDissertation
local.edoc.institutionMedizinische Fakultät - Universitätsklinikum Charité

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