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2007-01-11Dissertation DOI: 10.18452/15578
Überwindung der P-Glykoprotein (MDR1)-abhängigen Multidrugresistenz mittels RNA-Interferenz
dc.contributor.authorStege, Alexandra Eva
dc.date.accessioned2017-06-18T08:02:34Z
dc.date.available2017-06-18T08:02:34Z
dc.date.created2007-02-13
dc.date.issued2007-01-11
dc.identifier.urihttp://edoc.hu-berlin.de/18452/16230
dc.description.abstractP-Glykoprotein als Produkt des MDR1-Gens stellt einen gut untersuchten Mediator der Multidrugresistenz (MDR) in humanen Malignomen dar. Die Überexpression dieses ABC-Transporters steht in Korrelation zu einer erniedrigten Tumorremission und einer kürzeren Überlebensrate der Patienten. Bisherige Versuche, das Protein über niedermolekulare Substanzen (MDR-Modulatoren) zu inhibieren, vermochten in allen bisherigen klinischen Studien nicht zu überzeugen, so daß diese bis heute keinen Eingang in Standardtherapieschemata gefunden haben. Ziel dieser Arbeit war es, mittels RNA-Interferenz Strategien die Expression von MDR1 zu hemmen und eine Reversion der zellulären Chemoresistenz sowohl im Zellkultur- als auch im Tiermodell zu erreichen. Für die in vitro Untersuchungen an drei humanen multidrug-resistenten Karzinomzellinien wurden verschiedene siRNA (short interfering) Duplexe und shRNA (short hairpin)-exprimierende Vektoren gegen die MDR1 mRNA entwickelt. Die Behandlung der Zellen mit siRNAs führte zu einer bis zu 91 %igen Inhibition der MDR1 mRNA-Expression und zu einer Sensitivierung der Zellen gegenüber dem Anthrazyklin um 89 %. Diese Effekte konnte über einen Zeitraum von drei bis fünf Tagen aufrechterhalten werden. Die stabile Expression von anti-MDR1 shRNAs führte in zwei der untersuchten Zellmodelle zu einer dauerhaften und kompletten Überwindung des MDR1-abhängigen Resistenzphänotyps. Im Mausmodell konnte durch intratumorale Applikation des anti-MDR1 shRNA-kodierenden Vektors mittels low-volume Jet-Injektion eine komplette Reversion der MDR1-Überexpression sowie eine Wiederherstellung der Chemosensitivität gegenüber Doxorubicin in dem resistenten Tumormodell erreicht werden. Die Effizienz der kombinierten Gen- und Chemotherapie wird durch die Verminderung des in vivo Tumorwachstums auf das Volumen des von der sensiblen Zellinien-abgeleiteten Tumors reflektiert.ger
dc.description.abstractMultidrug resistance (MDR) is the major cause of failure of effective chemotherapeutic treatment of disseminated neoplasms. The "classical" MDR phenotype of human malignancies is mediated by drug extrusion by the adenosine triphosphate binding cassette (ABC)-transporter P-glycoprotein (MDR1/P-gp). For stable reversal of "classical" MDR in three human cancer cell lines by RNA interference (RNAi) technology, two small interfering RNA (siRNA) constructs and four H1-RNA gene promoter-driven expression vectors encoding anti-MDR1/P-gp short hairpin RNA (shRNA) molecules were constructed. In all cellular systems, siRNAs could specifically inhibit MDR1 expression up to 91% at the mRNA and protein levels. Resistance against daunorubicin was decreased to a maximum of 89%. The introduction of anti-MDR1/P-gp shRNA expression vectors leads in two of the three human cancer cell lines to a complete reversion of the MDR phenotype. The reversal of MDR was accompanied by a complete suppression of MDR1/P-gp expression on mRNA and protein level, and by a considerable increased intracellular anthracyline accumulation in the anti-MDR1/P-gp shRNA-treated cells. In a mouse xenograft model a complete in vivo restoration of MDR1 overexpression and chemosensitivity to doxorubicin could be obtained by intratumorally jet-injected anti-MDR1 shRNA in a multidrug resistant human cancer tumor model.eng
dc.language.isoger
dc.publisherHumboldt-Universität zu Berlin, Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät I
dc.rights.urihttp://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/
dc.subjectsiRNAger
dc.subjectMultidrug-Resistenz (MDR)ger
dc.subjectP-Glykoprotein (MDR1)ger
dc.subjectRNA-Interferenz (RNAi)ger
dc.subjectshRNAger
dc.subjectsiRNAeng
dc.subjectmultidrug resistance (mdr)eng
dc.subjectP-glycoprotein (MDR1)eng
dc.subjectRNA interference (RNAi)eng
dc.subjectshRNAeng
dc.subjectgene therapyeng
dc.subject.ddc570 Biowissenschaften, Biologie
dc.titleÜberwindung der P-Glykoprotein (MDR1)-abhängigen Multidrugresistenz mittels RNA-Interferenz
dc.typedoctoralThesis
dc.identifier.urnurn:nbn:de:kobv:11-10075165
dc.identifier.urnurn:nbn:de:kobv:11-10075975
dc.identifier.urnurn:nbn:de:kobv:11-10075989
dc.identifier.doihttp://dx.doi.org/10.18452/15578
dc.identifier.alephidHU002116696
dc.date.accepted2006-12-06
dc.contributor.refereeDenkert, Carsten
dc.contributor.refereeLage, Hermann
dc.contributor.refereeDreier, Wolfgang
dc.subject.dnb32 Biologie
dc.subject.rvkXH 3104
local.edoc.pages124
local.edoc.type-nameDissertation
local.edoc.institutionMathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät I

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