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2015-10-05Dissertation DOI: 10.18452/17331
Analysis of protein-protein interaction by in vivo quantitative proteomics in Caenorhabditis elegans
dc.contributor.authorChen, Jiaxuan
dc.date.accessioned2017-06-18T14:23:18Z
dc.date.available2017-06-18T14:23:18Z
dc.date.created2015-10-29
dc.date.issued2015-10-05
dc.identifier.urihttp://edoc.hu-berlin.de/18452/17983
dc.description.abstractIn C. elegans bietet die frühe Embryogenese ein attraktives Modellsystem, um Wechselwirkungen von Proteinen in vivo zu entschlüsseln. Zur präzisen Identifizierung von spezifischen Interaktionen im C. elegans Embryo wurde ein neuer quantitativer Ansatz entwickelt, welcher die Expression von Fusionsproteinen an grün fluoreszierendes Protein in vivo mit markierungsfreier Interaktionsproteomik kombiniert. Diese Strategie wurde angewandt, um die Interaktionspartner von acht Proteinen zu untersuchen, die in essentiellen biologischen Prozessen während der frühen Embryogenese involviert sind. Diese Studie liefert als Ergebnis ein erstes embryonales in vivo Interaktionsnetzwerk bestehend aus 559 Interaktionen zwischen 472 Proteinen. Dieses Netzwerk erfasst nicht nur bekannte Bindungen, sondern auch neue Interaktionen von hoher funktioneller Relevanz. Die Netzwerkinformationen wurden mit Experimenten auf Basis der Ribonukleinsäuren-Interferenz kombiniert um neue Regulatoren der sogenannten „P granules” ausfindig zu machen. Infolgedessen wurde das fadenwurmspezifische Protein GEI-12 als neuer Interaktionspartner der DYRK-Kinase MBK-2 und als wichtiger Regler für die Dynamik der „P granules“ und für die Aufrechterhaltung der Keimbahn identifiziert. Dies führt zu einem hypothetischen Modell in welchem der Phosphorylierungszustand von GEI-12 den Auf- und Abbau der „P granules“ während der frühen Embryogenese vermittelt. Darüber hinaus veranlasst GEI-12 auch die Entstehung von „P granules“ in Säugetierzellen und bindet an PP2A-Phosphatasen, was darauf hindeutet, dass die grundlegenden biophysikalischen Eigenschaften die zur Entstehung der Ribonukleoprotein-Körperchen notwendig sind, im Laufe der Evolution zwischen Spezies konserviert geblieben sind. Zusammenfassend stellt die in vivo Interaktionskartierung ein vielseitiges Werkzeug dar, welches nicht nur die funktionelle Organisation des Proteoms aufdeckt, sondern auch Einsichten in die tierische Entwicklungsbiologie liefert.ger
dc.description.abstractIn C. elegans, early embryogenesis provides an attractive model system for mapping in vivo protein interactions. In order to accurately identify specific interactions in C. elegans embryos, a new quantitative approach was developed combining in vivo expressed GFP fusion proteins with label-free interaction proteomics. This strategy was applied to studying the interaction partners of eight bait proteins involved in essential biological processes during early embryogenesis. As a result, this study generated a pilot embryo in vivo interaction network composed of 559 interactions among 472 proteins. Importantly, this network captures not only well-characterized bindings but also new interactions of high functional relevance. Further utility of the network is demonstrated by combining it with RNAi perturbation to search for new regulators of P granule formation in early embryos. Consequently, a worm-specific protein GEI-12 was discovered as a novel interaction partner of the DYRK kinase MBK-2 and as an important regulator of P granule dynamics and germline maintenance. This leads to a hypothetical model in which the phosphorylation state of GEI-12 mediates P granule assembly and disassembly during early embryogenesis. In addition, GEI-12 also induces granule formation in mammalian cells and interacts with PP2A phosphatases, indicating that the fundamental biophysical properties required for ribonucleoprotein granule formation are conserved across species during evolution. In summary, in vivo interactome mapping is a versatile approach that not only unravels the functional organization of the proteome but also can reveal insights into animal development.eng
dc.language.isoeng
dc.publisherHumboldt-Universität zu Berlin, Lebenswissenschaftliche Fakultät
dc.rightsNamensnennung - Keine kommerzielle Nutzung
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/de/
dc.subjectin vivoger
dc.subjectProtein-Protein-Interaktionger
dc.subjectquantitative Proteomikger
dc.subjectC. elegansger
dc.subjectEmbryogeneseger
dc.subjectP granuleger
dc.subjectin vivoeng
dc.subjectprotein-protein interactioneng
dc.subjectquantitative proteomicseng
dc.subjectC. eleganseng
dc.subjectembryogenesiseng
dc.subjectP granuleeng
dc.subject.ddc570 Biowissenschaften, Biologie
dc.titleAnalysis of protein-protein interaction by in vivo quantitative proteomics in Caenorhabditis elegans
dc.typedoctoralThesis
dc.identifier.urnurn:nbn:de:kobv:11-100233036
dc.identifier.doihttp://dx.doi.org/10.18452/17331
dc.identifier.alephidBV042956762
dc.date.accepted2015-09-21
dc.contributor.refereeLucius, Richard
dc.contributor.refereeSelbach, Matthias
dc.contributor.refereeLandthaler, Markus
dc.subject.dnb32 Biologie
dc.subject.rvkWC 4170
local.edoc.pages123
local.edoc.type-nameDissertation
local.edoc.institutionLebenswissenschaftliche Fakultät

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